基于单细胞转录组构建结直肠癌肿瘤相关巨噬细胞图谱

发布时间：2024-07-07 09:14

　　肿瘤相关巨噬细胞是浸润于肿瘤组织中的一类巨噬细胞,也是肿瘤微环境中最多的免疫细胞。在结直肠癌的环境中,巨噬细胞不仅浸润于肿瘤微环境中,也暴露于肠道的复杂环境中,表现出极大的异质性。我们通过单细胞转录组测序技术,解析结直肠癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞的图谱,以研究巨噬细胞的异质性。我们通过AOM/DSS诱导ApcMin杂合子小鼠,成功构建了小鼠炎症相关的结直肠癌肿瘤模型。我们通过酶消化法,制备不同组织的单细胞悬液。我们首先对小鼠肿瘤和癌旁组织进行单细胞测序,后利用流式细胞术分选出肿瘤中CD11b+髓系细胞,再进行单细胞转录组测序,共得到六组数据。通过对六组数据的分别分析以及合并分析,研究其基因表达特征,通过可视化方法分析,展示了细胞簇之间的异质性,并发现巨噬细胞簇主要来源于单核细胞。我们还表征了两个CX3CR1+的巨噬细胞细胞亚群,其表达特征与单核细胞来源的结肠巨噬细胞的极化特征相似。分析表明许多巨噬细胞簇同时表达M1型和M2型巨噬细胞的基因标记,处于M1/M2细胞型的中间状态。按照Vegfa的表达水平可以将巨噬细胞簇为高、中、低三类。Vegfa表达高的细胞簇除了表达巨噬细胞簇的特征分子也...

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【部分图文】：

图2-1AOM/DSS诱导小鼠周期

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文-13-12000xg离心1分钟，洗脱DNA，后测DNA的浓度。后进行PCR鉴定小鼠的基因型。(7)基因鉴定体系如表2-1，PCR参数如表2-2。引物序列如下。F:CATCTGCGAGATGATTTGTGAGR:TTTCTTTGTGCTGAACTTG....

图2-2AOM/DSS诱导过程中小鼠的体重变化(n=6)

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文-16-2.3.6细胞的流式细胞分选(1)流式细胞分选，每组需要设置空白对照。实验组进行抗体标记处理。(2)500xg4℃离心5分钟，弃上清，加入TruStainFcX抗体，避光孵育10分钟，封闭掉细胞表面的Fc受体。每106个细胞加入的体积为2μL....

图2-3ApcMin基因型鉴定凝胶电泳图

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文-17-PCR扩增所得条带的大小为1191bp。由图2-3可知扩增出条带位于1000和2000的条带之间，且条带位置与阳性对照一致，则证明该鼠为ApcMin小鼠。图2-3ApcMin基因型鉴定凝胶电泳图我们用小鼠的血液，利用其物理参数，验证CD11b....

图2-4CD45+CD11b+FSC-SSC流式分析图

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文-17-PCR扩增所得条带的大小为1191bp。由图2-3可知扩增出条带位于1000和2000的条带之间，且条带位置与阳性对照一致，则证明该鼠为ApcMin小鼠。图2-3ApcMin基因型鉴定凝胶电泳图我们用小鼠的血液，利用其物理参数，验证CD11b....

本文编号：4003485