PP2A/PHD2/HIF-1α信号轴对乳腺癌缺氧微环境血管生成拟态的调控及DMBT靶向干预作用研究

发布时间：2024-11-02 20:42

　　研究背景乳腺癌是全球年轻人发病率和死亡率最高的癌症类型,寻找乳腺癌治疗新靶点,研发特异性药物,是乳腺癌治疗亟待解决的问题。血管生成拟态(Vasculogenic mimicry,VM)是侵袭性乳腺癌表型的标志,是高侵袭性的肿瘤细胞自身围成的一种高度模式化和功能性管状结构,在肿瘤进展的各个阶段支持肿瘤生长和转移。VM形成过程中有许多因素是必需的,包括肿瘤缺氧微环境。缺氧微环境下,缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factors,HIF-lα)被认为是VM信号传导中的“启动开关”,它可以直接或间接调节VE-Cadherin的表达并激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)级联反应。最后,通过基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)的表达和激活,收缩基质进入细胞外微环境形成VM。但是,肿瘤细胞如何感知细胞外缺氧微环境的尚不清楚。HIF-lα虽然是对缺氧反应的执行者,但它本身并不直接感应氧气张力(p02)的变化,而是受脯氨酰4-羟化酶2(Prolyl-4-hydroxylases2,PHD2)的调节。PHD2的羟基化能调节HI...

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
    1. 血管生成拟态
    2. 缺氧微环境
        2.1 缺氧微环境概述
        2.2 PP2A与缺氧微环境
        2.3 PHD2与缺氧微环境
            2.3.1 PHD2概述
            2.3.2 PHD2对HIF-1α的调控
            2.3.3 PHD2信号通路
            2.3.4 PHD2核质分布
        2.4 VM与缺氧微环境
    3. 海藻糖衍生物研究现状
    4. 本课题的研究内容
实验材料和方法
    1.实验材料
        1.1 化合物
        1.2 细胞株
        1.3 腺病毒
        1.4 试剂、耗材
        1.5 试剂配制
        1.6 仪器设备
        1.7 实验动物
    2. 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 腺病毒转染
        2.3 构建缺氧模型
        2.4 MTT细胞生长抑制实验
        2.5 Western Blotting检测相关蛋白的表达
        2.6 细胞粘附实验
        2.7 划痕细胞迁移实验
        2.8 Transwell细胞迁移实验
        2.9 Transwell细胞侵袭实验
        2.10 体外血管生成拟态的形成
        2.11 免疫荧光PHD2蛋白亚细胞定位
        2.12 体外PP2A酶活性的测定
        2.13 体内乳腺癌肺转移实验
        2.14 CD34/APS双染实验
        2.15 统计学分析
实验结果
    3.1 第一部分:PP2A/PHD2/HIF-1α信号轴对乳腺癌细胞缺氧微环境下血管拟态的调控
        3.1.1 乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞体外缺氧模型的建立
        3.1.2 PP2A诱导剂FTY720和抑制剂OA对MCF-7和MDA-MB-231细胞的生长抑制作用
        3.1.3 缺氧环境下PP2A对MCF-7和MDA-MB-231细胞迁移的影响
        3.1.4 缺氧环境下PP2A对MCF-7和MDA-MB-231细胞侵袭的影响
        3.1.5 缺氧环境下PP2A对MCF-7和MDA-MB-231细胞粘附的影响
        3.1.6 缺氧环境下PP2A对MDA-MB-231细胞VM形成的影响
        3.1.7 缺氧环境下PP2A对MCF-7和MDA-MB-231细胞VM相关蛋白相关蛋白表达的影响
        3.1.8 缺氧环境下PP2A对裸鼠乳腺癌细胞肺转移的影响
        3.1.9 PP2A对裸鼠肺组织VM形成的影响:CD34/PAS双染
        3.1.10 缺氧环境对PP2A酶活性的影响
        3.1.11 PP2A对HIF积累的影响
        3.1.12 PP2A对乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞缺氧条件下HIF-1α的影响与PHD2有关
        3.1.13 PP2A对乳腺癌MDA-MB-231细胞PHD2亚细胞定位的影响
    3.2 第二部分:海藻糖衍生物DMBT靶向干预的机制研究
        3.2.1 DMBT和PP2A的分子对接研究
        3.2.2 缺氧环境下DMBT对PP2A酶活性的影响
        3.2.3 缺氧环境下DMBT对MDA-MB-231和MCF-7细胞VM的影响
        3.2.4 缺氧环境下DMBT对裸鼠乳腺癌细胞肺转移的影响
        3.2.5 CD34/PAS双染检测DMBT及PP2A对裸鼠肺组织VM形成的影响
        3.2.6 缺氧环境下DMBT及PP2A对乳腺癌MDA-MB-231细胞PHD2亚细胞定位的影响
讨论
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：4010106