真核翻译起始因子5A2（eIF5A2）通过活性氧相关通路调控肝癌细胞的侵袭和转移

发布时间：2017-06-08 13:16

  本文关键词：真核翻译起始因子5A2（eIF5A2）通过活性氧相关通路调控肝癌细胞的侵袭和转移，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,具有很高的发病率和死亡率,尤其是在东亚发展中国家。每年超过600000人死于肝细胞癌,且每年约有750000例新病例被诊断为肝细胞癌。肝细胞癌总体预后较差,总体5年生存率不到5%,这可能与术后的高转移复发率有关。由于缺乏有效的治疗方法,学者们致力于肝癌的侵袭和转移等机制的研究,以寻找新的治疗途径。越来越多的研究表明,真核翻译起始因子5A2 (eIF5A2)是肿瘤转移侵袭过程中的一个关键潜在靶基因。活性氧(ROS)在癌细胞增殖和迁移中也作为信号分子发挥着重要作用。然而,eIF5A2和ROS之间的潜在机制尚不清楚。目的：用相关分子生物学技术分析eIF5A2基因和ROS在肝细胞癌的侵袭和转移中的可能作用,探究eIF5A2调控肝癌细胞的侵袭转移是否与ROS相关通路有关,寻找肝细胞癌新的治疗靶点。方法：选取90例肝癌患者的癌组织和癌旁组织,组成肝癌180点组织芯片,利用免疫组化技术,检测组织中的eIF5A2蛋白表达信息,并进行生存统计分析,探究eIF5A2蛋白表达与患者预后的关系；用基因芯片技术探究GC7抑制eIF5A2的活性后,对肝细胞癌基因表达谱的改变,探究eIF5A2调控肝细胞癌的分子机制；用流式细胞术检测肝癌细胞在不同药物条件下的ROS水平；用小RNA干扰技术对特定基因进行抑制,沉默其基因表达,阻断eIF5A2基因的表达,为后续实验提供细胞模型；用transwell侵袭法和划痕愈合实验检测肝癌在不同药物条件下侵袭转移能力的改变,观察eIF5A2和ROS水平改变对肝癌细胞侵袭和转移能力是否有调控作用；用Western blot和免疫荧光技术检测不同药物条件下肝癌的上皮间质转化(EMT)蛋白标志物的表达信息和siRNA干扰效率,探究eIF5A2是否与肝癌细胞的EMT相关。结果：基因芯片结果分析表明,GC7抑制eIF5A2后引起ROS相关基因的表达水平下调；肝癌组织的免疫组化结果显示,eIF5A2在癌组织中的表达显著高于癌旁组织,Kaplan-Meier生存曲线显示eIF5A2表达的高低与总生存数相关,与预后密切相关；流式细胞术分析发现,6种肝癌细胞系在GC7抑制eIF5A2后均能使胞内ROS水平降低；Transwell实验和划痕愈合实验显示,抑制eIF5A2后肝癌细胞的侵袭和转移能力显著降低；GC7作用之后,肝癌细胞胞内的ROS水平降低；用NAC阻断ROS后,肝癌的侵袭和转移能力也显著降低,再加入GC7作用之后,GC7不能进一步抑制肝癌的侵袭转移能力；抑制eIF5A2和下调ROS水平可逆转肝癌的EMT进程；阻断肝癌细胞EMT之后,GC7和NAC对肝癌细胞的侵袭转移调控作用减弱。结论：真核翻译起始因子eIF5A2可能通过ROS相关通路调控肝癌细胞的EMT和侵袭转移。eIF5A2和ROS可能是肝癌侵袭转移潜在的预测指标和重要靶点。
【关键词】：肝细胞癌 真核翻译起始因子5A2(eIF5A2) 活性氧(ROS) 上皮间质转化(EMT) 侵袭 转移 预后
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 致谢4-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文缩略词10-14
• 1 引言14-18
• 2 实验材料与方法18-29
• 2.1 主要材料和试剂18-19
• 2.1.1 细胞来源18
• 2.1.2 主要试剂18-19
• 2.2 主要仪器19-21
• 2.3 实验方法21-29
• 2.3.1 细胞培养21-22
• 2.3.2 流式细胞仪测定细胞内ROS水平22
• 2.3.3 细胞总蛋白的提取与蛋白浓度测定22-23
• 2.3.4 Western Blot检测不同蛋白在不同条件下表达水平的变化23-26
• 2.3.5 小RNA转染26-27
• 2.3.6 Transwell法检测肝癌细胞的侵袭能为的变化27-28
• 2.3.7 划痕愈合实验检测肝癌细胞的转移能力的变化28
• 2.3.8 免疫荧光技术观察肝癌细胞特定蛋白的定位及其表达水平的变化28-29
• 3 实验结果29-51
• 3.1 EIF5A2与肝癌细胞ROS相关基因的联系29-30
• 3.2 EIF5A2在肝癌组织中的表达情况及其与预后的关系30-35
• 3.3 EIF5A2对肝癌细胞的侵袭转移的调控作用35-37
• 3.4 GC7可降低胞内ROS水平37-38
• 3.5 NAC对肝癌细胞的侵袭转移能力的调控作用38-41
• 3.6 GC7逆转EMT进程,阻断EMT后,GC7对肝癌细胞侵袭转移调控减弱41-45
• 3.6.1 GC7可逆转肝癌细胞EMT进程41-43
• 3.6.2 阻断EMT后,GC7对肝癌细胞侵袭转移调控减弱43-45
• 3.6.3 WB验证twist siRNA的转染效率45
• 3.7 NAC逆转EMT进程,阻断EMT后,NAC对肝癌细胞侵袭转移调控减弱45-51
• 3.7.1 NAC可逆转肝癌细胞EMT进程45-48
• 3.7.2 阻断EMT后,NAC对肝癌细胞侵袭转移调控减弱48-50
• 3.7.3 WB验证twist siRNA的转染效率50-51
• 4 讨论51-54
• 5 结论54-55
• 参考文献55-61
• 综述61-70
• 参考文献66-70
• 个人简介及硕士学习期间发表的论文70-71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 Shu-Bo Tian;Jian-Chun Yu;Yu-Qin Liu;Wei-Ming Kang;Zhi-Qiang Ma;Xin Ye;Chao Yan;;MiR-30b suppresses tumor migration and invasion by targeting EIF5A2 in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年31期

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本文编号：432646