异硫氰酸苯乙酯抑制胃癌侵袭转移及机制研究

发布时间：2017-06-10 02:03

  本文关键词：异硫氰酸苯乙酯抑制胃癌侵袭转移及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对人胃癌细胞株MGC-803侵袭迁移、化疗敏感性及干细胞表型的影响,尝试阐明其相关机制可能是通过影响转化生长因子-β1受体(TGF-β1R),调控上皮间质转化(EMT),改变胃癌干细胞(CSCs)表型发挥作用。方法：1.采用CCK-8法观察PEITC体外对胃癌细胞株MGC-803增殖的抑制作用,选择最佳给药浓度。2.采用CCK-8法检测PEITC对TGF-β1诱导的胃癌细胞MGC-803粘附能力影响,并与siRNA组做比较；采用Tranwell小室迁移及侵袭实验,观察PEITC对胃癌细胞株粘附、侵袭及迁移能力的影响。3.应用Western blot技术、免疫荧光技术研究PEITC对侵袭转移及EMT相关蛋白的影响。4.采用CCK-8法、Hoechst33258染色细胞流式技术观察PEITC对胃癌细胞株MGC-803化疗药物敏感性影响。5.应用Wsetern blot技术研究PEITC对凋亡相关蛋白的影响。6.采用流式细胞仪检测PEITC对胃癌细胞MGC-803干细胞表型的影响。7.采用流式细胞仪分选后不同亚型胃癌细胞MGC-803体外细胞成球及体内肿瘤皮下移植瘤成瘤能力观察验证不同表型胃癌细胞干细胞特性。结果：1.20μMPEITC作用于人胃癌细胞株MGC-803 24h后,胃癌细胞死亡约50%。2.与空白组及TGF-β1诱导组相比,PEITC明显降低了对照组及TGF-β1诱导组胃癌细胞的粘附、迁移及侵袭能力；3.对照组及TGF-β1诱导组的胃癌细胞接受PEITC给药24h后,分别与空白组及TGF-β1组相比较,能显著下调E-cad/N-cad转化、下调TGF-β1,上调Vimentin、Twist、MMP9及MMP14表达。4.10μM的PEITC能提高人胃癌细胞MGC-803对DDP的敏感性。TGF-β1能降低该敏感性,使胃癌细胞对化疗敏感性低于正常。5.Hoechst33258实验中我们发现,PEITC与DDP合用能提高DDP对肿瘤细胞核结构的破坏,促进人胃癌细胞株凋亡,siRNA与PEITC作用类似。6.通过细胞流式分析细胞凋亡可知,小剂量的PEITC可将DDP的早凋率由14.2%提升至40.0%,siRNA可将其早凋率提升至46.2%。7.Western blot检测凋亡相关蛋白caspase 3及c-caspase 3后发现,PEITC可促进caspase3的剪切及c-caspase 3的活化,提高人胃癌细胞MGC-803对DDP的敏感性,其作用于siRNA相似,与TGF-β1相反,结合第一部分实验,考虑可能与PEITC能抑制TGF-β1诱导的EMT转化有关。8.PEITC能下调胃癌常见干细胞标记物CD133、CD44、CD71,上调NESTIN,与siRNA作用相仿,与TGF-β1诱导结果相反。CD24未见规律性变化,综合考虑分选效率及预实验结果,选取CD 133、CD44及NESTIN作为分选标记物,进行细胞分选。9.结合体外成球实验及体内成瘤实验,我们可以证明,CD133+CD44+NESTIN-的细胞具有更强的干细胞特性。结论：PEITC能有效抑制人胃癌细胞株MGC-803增殖,并可降低其粘附、迁移及侵袭能力,其机制可能是通过调控TGF-β1受体来影响EMT转化及MMPs活化来实现的；小剂量PEITC能提高人胃癌细胞株MGC-803对化疗药物DDP敏感性,其作用可能与其通过调控EMT影响CSCs表型相关；PEITC能一定程度影响人胃癌细胞株MGC-803干细胞标记物,下调胃癌常见干细胞标记物CD 133、CD44、CD71,上调NESTIN,下调胃癌细胞中干细胞亚型比例,这可能与其调节TGF-β1R对TGF-β1受体,从而调控EMT相关联。
【关键词】：异硫氰酸苯乙酯 上皮间质转化 肿瘤干细胞 化疗增敏 转移
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 第一部分 理论研究13-20
• 1. 胃癌病因病机13-14
• 2. 现代医学对胃癌转移的认识14-19
• 2.1 肿瘤转移与EMT相关性14-15
• 2.2 EMT分子机制研究进展15-16
• 2.3 EMT、CSCs与肿瘤治疗相关性研究进展16-17
• 2.4 中医药干预肿瘤EMT、CSCs及化疗敏感性研究进展17-18
• 2.5 展望18-19
• 3. 白芥子有效成分异硫氰酸苯乙酯(PEITC)研究进展19
• 4. 总结19-20
• 第二部分 异硫氰酸苯乙酯对胃癌侵袭转移影响及机制研究20-37
• 一、研究方法20-30
• 1. 主要实验材料20-22
• 2. 实验方法22-30
• 二、研究结果30-34
• 1. PEITC对胃癌细胞株MGC-803增殖能力影响30
• 2. 粘附实验验证PEITC对人胃癌细胞株MGC-803粘附能力的影响30-31
• 3. 迁移实验验证PEITC对人胃癌细胞株MGC-803迁移能力的影响31-32
• 4. 侵袭实验验证PEITC对人胃癌细胞株MGC-803侵袭能力的影响32-33
• 5. PEITC对人胃癌细胞株MGC-803中TGF-β1含量的影响33-34
• 6. Western blot分析PEITC对人胃癌细胞株MGC-803侵袭转移相关蛋白表达的影响34
• 三、结论34-37
• 3.1 CCK-8细胞增殖实验34-35
• 3.2 粘附实验结果分析35
• 3.3 迁移实验结果分析35
• 3.4 侵袭实验结果分析35
• 3.5 免疫荧光实验结果分析35
• 3.6 Western Blot结果分析35
• 3.7 小结35-37
• 第三部分 异硫氰酸苯乙酯对胃癌化疗敏感性的影响37-43
• 一、研究方法37-39
• 1. 主要实验材料37-38
• 2. 实验方法38-39
• 二、研究结果39-41
• 1. CCK-8细胞增殖实验观察PEITC对人胃癌细胞株化疗敏感性影响39-40
• 2. Hoechst33258染色检测细胞凋亡40-41
• 3. 流式细胞仪检测细胞凋亡41
• 4. Western blot检测PEITC对凋亡相关蛋白影响41
• 三、结论41-43
• 3. ICCK-8细胞增殖实验观察PEITC对人胃癌细胞株化疗敏感性影响41-42
• 3.2 Hoechst33258染色检测细胞凋亡42
• 3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡42
• 3.4 Western blot检测凋亡相关蛋白42
• 3.5 小结42-43
• 第四部分 异硫氰酸苯乙酯对人胃癌细胞MGC-803干细胞表型的影响43-49
• 一、研究方法43-49
• 1. 主要实验材料43-44
• 2. 实验方法44-46
• 3. 实验结果46-48
• 4. 结论48-49
• 讨论49-52
• 不足与展望52-53
• 参考文献53-62
• 附表62-63
• 综述63-66
• 参考文献65-66
• 致谢66

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