微囊藻毒素-LR对人喉癌细胞Hep2蛋白磷酸酶2A的抑制作用及产生的细胞学影响
本文关键词：微囊藻毒素-LR对人喉癌细胞Hep2蛋白磷酸酶2A的抑制作用及产生的细胞学影响，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：研究背景：当今水体富营养化污染以及由此造成的蓝藻爆发已成为人类面临的首要环境问题。大量蓝藻在水体中生长时产生的许多有毒物质微囊藻毒素对水环境产生了严重影响并其对多种生物包括人类都具有威胁。因此,微囊藻毒素的毒性作用机理已然成为研究热点。微囊藻毒素LR是其中研究较为广泛,毒性较大的微囊藻毒素。目前认为,微囊藻毒素LR的主要致毒机理是通过抑制蛋白磷酸酶2A的活性从而产生一系列的细胞毒性作用。研究发现蛋白磷酸酶2A的活性对于肿瘤细胞的生长、增殖、粘附、迁移等都具有重要的作用。实验室的前期研究主要着眼于MCLR在多种正常细胞系中的致毒效应并获得了大量信息,也选择了一种肿瘤细胞进行了初步研究,为进一步探究MCLR对肿瘤细胞的作用,本实验选取了人喉癌上皮细胞Hep-2作为研究对象。研究方法：应用流式细胞仪、免疫印迹技术、免疫荧光技术、免疫共沉淀技术以及细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell肿瘤细胞迁移实验来研究不同浓度的MCLR (0.5μM、1μM、5μM和10μm)处理Hep-2细胞24小时后,产生各种细胞效应以及对PP2A活性的影响方式和相关分子变化。研究结果：在本实验的浓度和时间条件作用下,MCLR能够进入到Hep-2细胞内,与PP2A/C亚基共价结合抑制PP2A活性；MCLR能够影响PP2A各亚基蛋白水平,如下调PP2A/A蛋白表达,上调PP2A/C蛋白表达,略微下调PP2A/B55α亚基蛋白表达,但对PP2A/B56α亚基蛋白表达影响不明显；MCLR还会影响PP2A/C的翻译后修饰水平,上调PP2A/C亚基Tyr307位点磷酸化水平和Leu309位点的甲基化水平；MCLR能够导致Hep-2细胞内a4和PP2A/C亚基解离并影响AC核心酶稳定性；MCLR还能造成细胞骨架的重构以及骨架相关蛋白Tau、Ezrin和VASP磷酸化水平的上升；MCLR能够引起P38和ERK1/2通路的激活；MCLR能够促进Hep-2细胞迁移,但是对其细胞周期、细胞凋亡和细胞增殖影响不明显。研究结论：MCLR能够进入Hep-2细胞并抑制PP2A活性,其作用方式是与PP2A/C亚基共价结合、改变PP2A各亚基蛋白水平及PP2A/C亚基翻译后修饰水平、改变a4与PP2A/C亚基、AC核心酶的结合等。MCLR引起Hep-2细胞骨架重构与PP2A影响骨架相关蛋白磷酸化有关.MCLR促进Hep-2细胞迁移,提示MCLR具有促进肿瘤侵袭的作用。
【关键词】：微囊藻毒素-LR 蛋白磷酸酶2A 细胞骨架 细胞骨架相关蛋白 细胞迁移
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.65
【目录】：
- 致谢4-5
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 缩略词表9-12
- 1 前言12-16
- 2 实验材料16-23
- 3 实验方法23-28
- 4 实验结果28-47
- 4.1 MCLR可进入Hep-2细胞但不对细胞活力产生严重影响28-30
- 4.1.1 MCLR在本实验条件下不对细胞活性产生严重影响28
- 4.1.2 MCLR可进入Hep-2细胞28-30
- 4.2 MCLR对PP2A活性以及其各亚基蛋白水平和翻译后修饰水平的影响30-33
- 4.2.1 MCLR抑制PP2A活性31
- 4.2.2 MCLR改变PP2A各亚基蛋白表达水平31-32
- 4.2.3 MCLR改变PP2A/C翻译后修饰水平32-33
- 4.3 MCLR导致Hep-2细胞内α4和PP2A/C亚基解离并影响AC核心酶稳定性33-36
- 4.3.1 MCLR造成α4和PP2A/C,PP2A/A和PP2A/C的解离34-35
- 4.3.2 MCLR影响α4和PP2A/C在Hep-2中细胞定位35-36
- 4.4 MCLR对细胞骨架以及骨架相关蛋白的影响36-40
- 4.4.1 MCLR造成细胞骨架的重构36-37
- 4.4.2 MCLR造成骨架相关蛋白磷酸化水平的改变37-38
- 4.4.3 MCLR对骨架相关蛋白Tau和Ezrin细胞定位影响不明显38-40
- 4.5 MCLR对MAPK家族蛋白的影响40-42
- 4.5.1 MCLR激活P38和ERK1/2 MAPK通路40-41
- 4.5.2 MCLR对P38 MAPK和ERK1/2下游转录因子的影响41-42
- 4.6 MCLR刺激Hep-2细胞产生的细胞效应42-47
- 4.6.1 MCLR对Hep-2细胞周期影响不明显43
- 4.6.2 MCLR对Hep-2细胞凋亡影响不明显43-44
- 4.6.3 MCLR对Hep-2细胞增殖影响不明显44-45
- 4.6.4 MCLR对Hep-2细胞迁移具有促进作用45-47
- 5 讨论47-54
- 5.1 MCLR抑制PP2A活性及作用方式47-48
- 5.2 MCLR造成细胞骨架重构与PP2A活性抑制有关48-51
- 5.3 MCLR对细胞迁移的影响与细胞骨架重构有关51-52
- 5.4 MCLR在不同细胞系中的作用比较52-54
- 6 结论54-55
- 参考文献55-60
- 综述 蛋白磷酸酶2A与肿瘤及肿瘤治疗现状60-67
- 参考文献65-67
- 作者简历及在学期间参加的科研工作学习经历67-68
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本文编号：451522
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