组蛋白H3精氨酸单ADP核糖基化对大肠癌细胞E-cadherin表达影响的初步研究

发布时间：2017-06-16 05:07

  本文关键词：组蛋白H3精氨酸单ADP核糖基化对大肠癌细胞E-cadherin表达影响的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:初步探讨大肠癌组蛋白H3精氨酸单ADP核糖基化修饰对大肠癌细胞E-cadherin表达的影响及其可能的机制。方法:本课题分为四部分。1单腺苷二磷酸核糖基化转移酶ARTD8和ARTD14在人大肠腺癌组织中的表达及意义:采用免疫组织化学方法对65例大肠癌组织标本分别检测ARTD8和ARTD14在大肠癌组织的表达情况。2不同分化程度大肠癌细胞株组蛋白单ADP核糖基化修饰差异检测:应用四级串联质谱检测人大肠癌LOVO细胞株和SW480细胞株中组蛋白单ADP核糖基化修饰的差异。3组蛋白H3第117位精氨酸单ADP核糖基化对大肠癌细胞E-cadherin表达及癌细胞迁移能力的影响:(1)分别将pLenti-H3mut1-IRES-eGFP和p Lenti-H3 mut2-IRES-eGFP慢病毒载体稳定转染至人大肠癌LOVO细胞,构建稳定氨基酸突变细胞株。(2)Western Blot和QPCR分别检测未转染LOVO细胞组、转染空载体LOVO细胞组(LV-control LOVO细胞组)、H3 R117A LOVO细胞组和H3 R117K LOVO细胞组中E-cadherin蛋白和mRNA水平。(3)细胞划痕实验、Transwell迁移能力实验检测未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组、h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组癌细胞迁移能力。4组蛋白h3第117位精氨酸单adp核糖基化对大肠癌细胞e-cadherin影响的分子机制研究:(1)westernblot检测未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组、h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组中parp1蛋白水平。(2)westernblot检测未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组、h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组中h3k9甲基化水平。(3)qpcr检测未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组、h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组中fbp1的mrna的转录水平。结果:1单腺苷二磷酸核糖基化转移酶artd8和artd14在人大肠腺癌组织中的表达及意义。(1)artd8在大肠腺癌和正常大肠组织中均有表达,在大肠腺癌细胞,artd8主要分布于细胞质中,同时见于部分细胞核中;在正常大肠黏膜腺体,则仅分布于细胞质中。artd8在大肠腺癌组织中表达强度高于正常大肠黏膜细胞(p0.05)。直肠腺癌细胞artd8核阳性表达率高于正常大肠黏膜(p0.05),同时高于结肠腺癌细胞核阳性表达率(p0.05)。(2)artd14在大肠腺癌和正常大肠组织中均有表达,在大肠腺癌细胞,artd14主要分布于细胞质中,同时见于部分细胞核中;在正常大肠黏膜腺体,则仅分布于细胞质中。artd14在大肠腺癌组织中表达强度高于正常大肠黏膜细胞(p0.05),并与肿瘤的分化程度存在相关性(p0.05)。结肠腺癌细胞artd14核阳性表达率高于正常大肠黏膜(p0.05)。2不同分化程度人大肠癌细胞株中组蛋白单adp核糖基化修饰的检测:四级串联质谱检测结果显示,lovo细胞组蛋白h3的第117位精氨酸存在单adp核糖基化修饰,而sw480细胞组蛋白h3第117位则不存在这一修饰。3组蛋白h3第117位精氨酸单adp核糖基化对大肠癌细胞e-cadherin表达及癌细胞迁移能力的影响。(1)将plenti-h3mut1-ires-egfp和plenti-h3mut2-ires-egfp慢病毒载体分别转染至人大肠癌lovo细胞,荧光显微镜下观察,转染空载体lovo细胞、h3r117alovo细胞和h3r117klovo细胞均可以见到绿色荧光,而且荧光细胞达到总细胞数的80%。(2)westernblot、qpcr结果显示h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组e-cadherin蛋白和mrna水平较未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组e-cadherin蛋白和mrna水平明显增加。未转染lovo细胞组与转染空载体lovo细胞组无明显差异,h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组无差异。(3)细胞划痕实验、transwell迁移实验结果显示,h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组中细胞的迁移能力比未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组低。未转染lovo细胞组与转染空载体lovo细胞组无明显差异,h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组无差异。4组蛋白h3第117位精氨酸单adp核糖基化对大肠癌细胞e-cadherin影响的分子机制研究(1)westernblot结果显示h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组中parp1蛋白水平较未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组明显降低。未转染lovo细胞组与转染空载体lovo细胞组无明显差异,h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组无差异。(2)westernblot结果显示h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组中h3k9me2水平较未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组明显下降。未转染lovo细胞组与转染空载体lovo细胞组无明显差异,h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组无差异。(3)qpcr结果显示h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组中fbp1mrna水平较未转染lovo细胞组、转染空载体lovo细胞组明显增加。未转染lovo细胞组与转染空载体lovo细胞组无明显差异,h3r117alovo细胞组和h3r117klovo细胞组无差异。结论:1.artd8和artd14在大肠癌组织表达强度较正常大肠组织高,artd14表达与大肠癌分化程度存在相关性,提示artd8和artd14可能与大肠癌发生发展有关;直肠腺癌细胞artd8核阳性表达率高于正常大肠黏膜、结肠腺癌细胞artd14核阳性表达率高于正常大肠黏膜,提示大肠癌核内也存在着单adp核糖基化作用,artd8和artd14可能影响组蛋白单adp核糖基化修饰对大肠癌发挥调节作用,但具体作用氨基酸位点尚有待进一步研究。2.组蛋白h3第117位精氨酸单adp核糖基化作用可以影响LOVO细胞E-cadherin的表达和癌细胞迁移能力。3.组蛋白H3第117位精氨酸单ADP核糖基化作用可通过调节PARP1引起组蛋白H3K9me2水平变化,影响FBP1的转录,从而引起E-cadherin的表达发生变化,最终导致细胞的迁移能力增加。
【关键词】：组蛋白精氨酸单ADP核糖基化 E-cadherin 组蛋白甲基化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-10
• 英文摘要10-16
• 前言16-19
• 参考文献17-19
• 第一部分 单腺苷二磷酸核糖基化转移酶ARTD8和ARTD14在大肠腺癌中的表达及意义19-29
• 1 材料和方法19-20
• 2 实验结果20-25
• 3 讨论25-27
• 参考文献27-29
• 第二部分 不同分化程度人大肠癌细胞株中组蛋白单ADP核糖基化修饰的检测29-35
• 1 材料和方法29-32
• 2 实验结果32
• 3 讨论32-33
• 参考文献33-35
• 第三部分 组蛋白H3第117位精氨酸单ADP核糖基化对大肠癌细胞E-cadherin表达和癌细胞迁移的影响35-49
• 1 材料和方法35-41
• 2 实验结果41-46
• 3 讨论46-48
• 参考文献48-49
• 第四部分 组蛋白H3第117位精氨酸单ADP核糖基化对大肠癌细胞E-cadherin影响的分子机制研究49-56
• 1 材料和方法49-50
• 2 实验结果50-53
• 3 讨论53-55
• 参考文献55-56
• 全文总结56-58
• 文献综述58-67
• 参考文献63-67
• 致谢67-68
• 硕士期间发表论文情况68

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