JNK1与VDR的相互作用及其对Vit D介导的抑制结肠癌细胞增殖的影响

发布时间：2017-06-20 12:05

  本文关键词：JNK1与VDR的相互作用及其对Vit D介导的抑制结肠癌细胞增殖的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景Vit D(Vitamin D)是一种用于肿瘤预防的药物,在体内外实验中通过VDR(Vitamin D receptor)来阻止结肠癌肿瘤的发生。有研究显示,应激活化蛋白激酶c-JNKs(c-Jun NH2-terminal kinases)和p38共同作用激活VDR,并增强Vit D介导的对乳腺癌细胞生长的抑制作用。本课题旨在研究在结肠癌细胞中Vit D介导的对癌细胞增殖的抑制作用是否和JNK1相关。目的以人结肠癌细胞HT29和从JNK1-/-小鼠模型中提取的肠上皮细胞和MEFs(mouse embryonic fibroblasts)为研究对象,探讨Vit D通过VDR对结肠癌细胞增殖所起的抑制作用是否与JNK1有关,进而为进一步研究人结肠癌防治方法提供科学依据。方法1.用Vit D3的一种活性物质钙三醇培养人结肠癌细胞HT29后,通过MTS实验和流式细胞技术分析,检测Vit D3对细胞增殖和周期的影响。2.分离JNK1-/-(JNK1 knockout)和JNK1+/+(JNK1 wild type)小鼠的肠上皮细胞,再从分离得到的肠上皮细胞中提取蛋白,通过western blotting检测其中的VDR蛋白的表达水平。3.在JNK1-/-小鼠的MEFs中转染VDR Ex4-luc报告质粒,通过荧光素酶报告基因活性分析检测VDR报告基因的活性。4.在体外实验中,向JNK1-/-MEFs中转染pcDNA3-Flag-MKK7-JNK1质粒,过表达p-JNK1(phosphorylated JNK1,JNK1的一种活化形式),通过western blotting和荧光素酶报告基因活性分析分别检测VDR的表达水平及转录活性。5.将带pDs-Red标签的JNK1表达质粒和带GFP标签的VDR表达质粒共同转染至HEK293细胞中,48h后经过处理,置于共聚焦显微镜下观察,检测JNK1与VDR是否共定位。6.将敲低JNK1的siRNA转染进入HT29细胞中,再用钙三醇作用于HT29细胞和JNK1-/-MEFs,通过活力细胞计数来检测敲除JNK1对钙三醇抑制结肠癌细胞增殖作用的影响。结果1.MTS实验和流式细胞技术分析结果显示:钙三醇能够显著抑制结肠癌细胞增殖并引起细胞周期停滞,钙三醇对细胞的这种作用与磷酸化水平升高的JNK1有关。2.western blotting结果显示:与JNK1+/+小鼠的肠上皮细胞相比,JNK1-/-小鼠的肠上皮细胞中VDR的表达水平显著下降。3.荧光素酶报告基因活性分析结果显示:与对照组相比,VDR的报告基因活性也有所下降。4.western blotting和荧光素酶报告基因活性分析结果显示:过表达p-JNK1能够上调VDR的表达水平和转录活性。5.共定位结果显示:JNK1与VDR在细胞核和细胞质中可以共定位,且二者结合在一起。6.活力细胞计数结果显示:敲除细胞中的JNK1和JNK1-/-MEFs中JNK1的表达缺失,都可以减弱钙三醇对结肠癌细胞增殖的抑制作用。结论JNK1在结构和功能上与VDR相互作用,可以明确地是,JNK1可以在转录和翻译水平上正向调节VDR的表达,且二者之间的这种相互作用可以影响钙三醇对癌细胞增殖的抑制作用。
【关键词】：结肠癌 JNK1 VDR 增殖 细胞周期
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-11
• 1 材料与方法11-23
• 2 结果23-30
• 3 讨论30-32
• 4 结论32-33
• 参考文献33-37
• 综述 JNK1与VDR的研究进展37-55
• 参考文献46-55
• 附录 英文缩略词55-57
• 攻读学位期间发表文章情况57-59
• 致谢59-60
• 个人简历60

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本文编号：465529