FoxC1在鼻咽癌组织和细胞中的表达及其与EMT相关分子标志物关系的初步研究

发布时间：2017-06-23 11:05

  本文关键词：FoxC1在鼻咽癌组织和细胞中的表达及其与EMT相关分子标志物关系的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测鼻咽癌组织和细胞中FoxC1的表达情况。初步探讨沉默FoxC1基因对鼻咽癌细胞CNE2生物学行为的影响。初步分析FoxC1与EMT相关分子标志物相关性。方法:(1)采用组织芯片及免疫组化技术检测93例鼻咽癌组织标本和33例慢性鼻咽炎性组织标本中FoxC1的表达。(2)采用Western blot法检测FoxC1在鼻咽癌细胞株6-10B、5-8F、CNE1、CNE2和永生化鼻咽上皮细胞株NP69中的表达情况,筛选出FoxC1表达最高的细胞株。(3)通过FoxC1siRNA沉默鼻咽癌细胞CNE2中FoxC1的表达,采用Western blot法检测FoxC1沉默效果。(4)采用MTT法、DAPI细胞核染色法检测FoxC1沉默后鼻咽癌细胞CNE2体外增殖能力以及凋亡的变化;利用Transwell小室实验检测FoxC1沉默后鼻咽癌细胞CNE2体外迁移和侵袭能力的变化。(5)采用免疫组化技术检测上述93例鼻咽癌组织标本中EMT相关分子标志物Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的表达,采用Western blot法检测FoxC1沉默后鼻咽癌细胞CNE2中EMT相关分子标志物Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的变化。结果:(1)FoxC1在93例鼻咽癌组织中有40(43.0%)例高表达,明显高于FoxC1在33例慢性鼻咽炎性组织中4(12.1%)例高表达(P0.01)。FoxC1的表达与鼻咽癌患者肿瘤的淋巴结转移、远处转移及临床分期存在相关性。(2)foxc1在永生化鼻咽上皮细胞np69中表达最低,高转移潜能鼻咽癌细胞5-8f高于低转移潜能鼻咽癌细胞6-10b,低分化鼻咽癌细胞cne2高于高分化鼻咽癌细胞cne1。对五组细胞foxc1表达情况进行两两比较,发现5-8f、6-10b、cne2、cne1细胞的foxc1表达水平与np69细胞相比均显著升高,有统计学意义(p5-8f,np690.01,p6-10b,np690.01,pcne2,np690.01,pcne1,np690.01)。鼻咽癌细胞株中,在5-8f细胞中的表达高于在6-10b细胞中的表达(p0.01),在cne2细胞中的表达高于在cne1细胞中的表达(p0.01)。(3)经westernblot检测,sifoxc1-1657组能显著降低鼻咽癌细胞cne2中foxc1的表达。(4)经sirna处理后foxc1沉默的实验组cne2细胞与对应时间点对照组cne2细胞相比,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(p0.05)。镜下观察foxc1沉默的实验组cne2细胞的细胞核较阴性及空白对照组未见明显增多的凋亡改变。foxc1沉默的实验组cne2细胞在体外迁移和侵袭实验中到达下室的细胞数量均明显少于空白对照组(pmigration0.01,pinvasion0.01)。(5)在40例高表达foxc1的鼻咽癌组织中,vimentin、fibronectin、n-cadherin的高表达率分别为29/40(72.5%)、25/40(62.5%)、39/40(97.5%),高于在53例foxc1低表达的鼻咽癌组织中vimentin、fibronectin、n-cadherin的高表达率22/53(41.5%)、20/53(37.7%)、42/53(79.3%),差异有统计学意义(pvimentin0.01,pfibronectin0.05,pn-cadherin0.05);e-cadherin和β-catenin在高表达foxc1的鼻咽癌组织中高表达率分别为26/40(65.0%)、24/40(60.0%),在foxc1低表达的鼻咽癌组织中的高表达率为34/53(64.2%)、39/53(73.6%),差异无统计学意义(pe-cadherin0.05,pβ-catenin0.05)。在经sirna沉默foxc1的实验组cne2细胞中,vimentin、fibronectin、n-cadherin的表达较空白对照组降低,差异有统计学意义(pvimentin0.01,pfibronectin0.01,pn-cadherin0.01);E-cadherin和β-Catenin的表达较对照组变化差异无统计学意义(PE-cadherin0.05,Pβ-Catenin0.05)。结论:FoxC1在鼻咽癌组织和细胞中高表达以及与鼻咽癌患者肿瘤的临床分期及淋巴结转移相关,其可能在鼻咽癌的发生发展中起到重要作用。本研究所设计的针对人FoxC1的siRNA能够有效的下调鼻咽癌细胞CNE2中FoxC1的表达,为进一步研究FoxC1在鼻咽癌细胞中的作用提供了实验基础。通过siRNA沉默FoxC1能降低鼻咽癌细胞CNE2的体外侵袭和迁移能力,其可能参与了鼻咽癌的侵袭和转移。在组织中FoxC1的高表达与Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的高表达相关,在FoxC1沉默的CNE2细胞中Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的表达下调,其可能通过调控间质标志物的表达,进而参与鼻咽癌上皮—间质转化的过程,从而促进鼻咽癌的侵袭和转移,有潜力成为鼻咽癌治疗的一个新靶点。
【关键词】：FoxC1 鼻咽癌 转移 侵袭 上皮—间质转化
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英汉缩略词对照表10-12
• 前言12-16
• 1 材料与方法16-29
• 1.1 实验材料16
• 1.2 主要实验试剂16-18
• 1.3 主要实验仪器18
• 1.4 实验方法18-29
• 2 结果29-37
• 2.1 Fox C1在鼻咽癌组织中的表达及与临床病理特征相关性29-30
• 2.2 Fox C1在鼻咽癌细胞株中的表达30-31
• 2.3 Western blot检测CNE2细胞中Fox C1的沉默效果31-32
• 2.4 F o x C 1 沉默后对C N E 2 细胞生物学行为的影响32-34
• 2.5 E M T相关分子标记物检测34-37
• 3 讨论37-43
• 4 结论43-44
• 参考文献44-48
• 综述48-59
• 综述参考文献55-59
• 攻读学位期间发表的学术论文目录59-60
• 致谢60

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本文编号：474806