负载姜黄素的纳米胶束对宫颈癌的抑制作用研究

发布时间：2017-06-24 17:08

  本文关键词：负载姜黄素的纳米胶束对宫颈癌的抑制作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:制备负载姜黄素的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸纳米胶束(m PEG-PLA/CUR)。通过观察m PEG-PLA/CUR纳米胶束的载药量、包封率、粒径及体外药物释放情况来了解其理化性质;进一步考察m P EG-PLA/CUR体外对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用、细胞摄取及体内抗肿瘤作用,并初步探讨其抗宫颈癌的可能机制。方法:该研究分两个阶段完成。第一阶段(体外阶段):采用固体分散法制备出三组不同姜黄素浓度的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸载姜黄素纳米胶束(m PEG-PLA/CUR)。采用高效液相色谱仪测定三组不同姜黄素浓度的m P EG-PLA/CUR纳米胶束的包封率和载药量,选定其中具有较高包封率和载药量的一组浓度为后续实验所用纳米药物。原子力显微镜下观察选定浓度的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸载姜黄素纳米胶束的形貌,激光粒径分析仪测定m PEG-PLA/CUR纳米胶束的粒径。选用选定浓度的m PEG-PLA/CUR纳米胶束进行体外药物释放实验,通过高效液相色谱仪测定其体外药物释放。通过MTT法测定生理盐水、空白载体m PEG-PLA聚合物、游离姜黄素、m PEG-PLA/CUR纳米胶束对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用。通过倒置荧光显微镜观察宫颈癌Hela细胞对空白载体m PEG-PLA聚合物、m PEG-PLA/CUR纳米胶束、游离姜黄素的摄取。第二阶段(体内阶段):构建动物模型,首先将36只裸鼠用耳钉编号,皮下接种人宫颈癌细胞成瘤后的裸鼠随机分为4组(各组分别为9只),向每组抽取其中3只用做免疫组化,用剩下的6只裸鼠来观察生存期,具体分组情况为:(1):生理盐水组(阴性组);(2):空白载体m PEG-PLA聚合物组(载体组);(3):游离姜黄素组(25mg/Kg)(游离组);(4):m PEG-PLA/CUR纳米胶束组(以姜黄素剂量计算25mg/Kg)(复合组)。待肿瘤长到约0.1cm3时通过裸鼠尾静脉分别注射四组药物(按照0.005ml/10g),每隔1天注射一次,共注射两周。每隔2天使用游标卡尺测量一次瘤块的长、短径,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线图;同时观察裸鼠的生长状态、一般情况及生存期,在给完2周药后每个组分别处死3只裸鼠,剥离瘤块,测量瘤重,绘制瘤重曲线图,再通过免疫组化法测定其Ki-67、MVD(CD31)、VEGF初步探讨m PEG-PLA/CUR纳米胶束抗宫颈癌的可能机制。结果:1、成功制备出三组不同浓度的m PEG-PLA/CUR纳米胶束。2、分别测定三组m PEG-PLA/CUR纳米胶束,载药量分别为3.22±0.51%、7.22±0.42%、8.06±1.5%,包封率分别为80.58±0.13%、90.42±0.05%、80.6±0.15%,证实m PEG-PLA(92mg)载姜黄素(8mg)纳米胶束具有良好的载药量与包封率。3、m PEG-PLA(92mg)载姜黄素(8mg)纳米胶束的平均粒径为119.6nm,粒径分散均匀,呈单峰分布。4、游离姜黄素中的姜黄素在12小时内大约66%从透析袋中释放出来,在24小时大约80%姜黄素从透析袋中释放出来;然而m PEG-PLA/CUR纳米胶束中的姜黄素在第14天的时候仅有59%从纳米胶束中释放出来,证实m PEG-PLA/CUR纳米胶束具有良好的缓释特性。5、通过倒置荧光显微镜观察经过空白载体m PEG-PLA处理后的Hela细胞始终未见绿色荧光,用游离姜黄素处理后的Hela细胞在2小时后观察到微弱绿色荧光、4小时后观察到稍强绿色荧光,然而经过m PEG-PLA/CUR纳米胶束处理后的Hela细胞在2小时后观察到稍强绿色荧光、4小时后观察到明亮绿色荧光。证实m PEG-PLA/CUR纳米胶束具有良好的细胞渗透性特性。6、姜黄素浓度为6.25ug/ml、12.5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的m PEG-PLA/CUR纳米胶束可显著抑制人宫颈癌Hela细胞的生长,抑制作用具有浓度依耐性。与游离姜黄素相同浓度的m PEG-PLA/CUR纳米胶束对人宫颈癌Hela细胞抑制作用强于游离姜黄素(P0.05)。m PEG-PLA聚合物是一种理想、安全、毒性较低的纳米载体。7、测定四组裸鼠瘤块增长情况后得出复合组(1.21±1.16cm3)、阴性组(2.82±1.34cm3)、载体组(2.35±1.31cm3)、游离组(1.67±1.16cm3),复合组与其他三组相比明显抑制了宫颈癌细胞的生长(P0.05),差异具有统计学意义,而载体组则没有明显显示出抗肿瘤作用。四组裸鼠的中位生存时间分别为复合组160天、游离组135天、载体组115天、阴性组87天,复合组与剩下三组相比中位生存期明显延长且差异具有统计学意义(P0.05)。8、测定四组免疫组化的瘤块重量分别是复合组瘤重为(0.08±0.14g)、游离组为(0.10±0.03g)、载体组为(0.39±0.17g)、阴性组为(0.37±0.14g),复合组和游离组与载体组、阴性组相比瘤块重量明显减轻(P0.05),差异具有统计学意义。复合组中观察到Ki-67阳性细胞比例为(53.33±8.82%),其阳性细胞比例明显比游离组(80±5%,P0.01)、载体组(90±5%,P0.01)、阴性组(93.33±2.89%,P0.01)低,且差异具有统计学意义;VEGF阳性细胞比例在复合组中(25±13.23%)和游离组中(28.33±12.58%),与载体组(56.67±15.28%)、阴性组(65±18.03%)相比,复合组和游离组均较低(P0.05),显示出明显的统计学差异;与阴性组(3±1个,P0.01)、载体组(2.67±0.58个,P0.01)相比,复合组(MPEG-PLA/CUR纳米胶束组)肿瘤块中微血管条数(0.67±0.58个)明显更少,并且具有显著统计学意义的,但是复合组与游离组相比CD31个数无统计学差异(P0.05)。结论:1、采用固体分散法成功制备出三组不同浓度的m PEG-PLA载姜黄素纳米胶束,随着游离姜黄素浓度的增加,载药量也在随着增加,但其包封率未见明显增加。其中8%浓度组的m PEG-PLA(92mg)载姜黄素(8mg)纳米胶束具有良好的载药量与包封率,粒径分散均匀,呈单峰分布,具有良好缓释特性;2、同时m PEG-PLA/CUR的细胞毒性具有明显浓度依赖性;3、m PEG-PLA聚合物可明显提高姜黄素的生物利用度,是一种安全理想、毒性较低的药物载体;4、与阴性组、载体组、游离组相比,复合组具有明显抑制肿瘤生长及延长了裸鼠的中位生存期的作用;其m PEG-PLA/CUR纳米胶束抗肿瘤作用的优势在于m PEG-PLA载药体系提高了姜黄素的水溶性和缓释性。
【关键词】：姜黄素 纳米胶束 宫颈癌
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-14
• 前言14-17
• 材料与方法17-32
• 结果32-48
• 讨论48-53
• 结论53-54
• 参考文献54-58
• 英汉缩略词对照表58-59
• 致谢59-60
• 姜黄素对宫颈癌放射增敏研究进展(综述)60-70
• 参考文献67-70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 沈方方;李银萍;;CYP 2J2和MMP-9在宫颈癌组织中的表达及其临床意义[J];武汉大学学报(医学版);2014年01期

2 王菁鹏;林青;;姜黄素对子宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用及其机制的研究[J];现代肿瘤医学;2006年08期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 余俚瑶;姜黄素抑制宫颈癌Hela细胞增殖机制研究[D];华中科技大学;2007年

  本文关键词：负载姜黄素的纳米胶束对宫颈癌的抑制作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：478873