HELQ激活CHK1-RAD51信号通路抑制人骨肉瘤细胞恶性表型

发布时间：2017-06-27 14:15

  本文关键词：HELQ激活CHK1-RAD51信号通路抑制人骨肉瘤细胞恶性表型，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨HELQ对人骨肉瘤细胞DNA损伤修复及恶性表型的影响及分子机制。方法:构建靶向HELQ的慢病毒载体(Lv-sh HELQ、Lv-HELQ)和阴性对照载体,分别转染人骨肉瘤细胞系143B和U2-OS细胞,阴性慢病毒转染为阴性对照。转染48h后,分别运用Transwell实验、划痕实验、CCK8实验和彗星实验检测人骨肉瘤细胞的侵袭、迁移、增殖能力以及细胞中DNA损伤水平。运用荧光定量PCR实验检测细胞中HELQ mRNA表达水平,Western Blot实验检测细胞中HELQ、CHK1以及RAD51蛋白表达水平。结果:骨肉瘤细胞系143B和U2-OS细胞中HELQ mRNA表达水平明显低于成骨细胞,而HELQ蛋白表达水平却明显高于成骨细胞。与阴性对照组相比,下调HELQ的表达水平可以显著增强骨肉瘤细胞的侵袭、迁移以及增殖能力,而上调HELQ的表达水平可以显著抑制骨肉瘤细胞的侵袭、迁移以及增殖能力;上调HELQ的骨肉瘤细胞中DNA损伤水平明显下降,而下调HELQ的骨肉瘤细胞中DNA损伤水平明显上升。与阴性对照相比,转染Lv-HELQ的骨肉瘤细胞中HELQ、CHK1、RAD51蛋白表达水平明显升高,而转染Lv-sh HELQ的骨肉瘤细胞中HELQ、CHK1、RAD51蛋白表达水平明显下降。结论:HELQ可激活CHK1-RAD51信号通路促进DNA修复并抑制骨肉瘤细胞的恶性表型。
【关键词】：骨肉瘤 HELQ DNA损伤 CHK1 RAD51
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 中英文缩略词表7-8
• 第1章 引言8-10
• 第2章 材料与方法10-24
• 2.1 细胞株10
• 2.2 慢病毒载体10
• 2.3 主要仪器10-11
• 2.4 主要试剂11-12
• 2.4.1 细胞培养主要试剂11
• 2.4.2 荧光定量PCR主要试剂11
• 2.4.3 Western Blot实验主要试剂11-12
• 2.4.4 其他12
• 2.5 主要试剂的配制12-14
• 2.5.1 细胞培养主要试剂配制12
• 2.5.2 qRT-PCRPCR实验主要试剂配制12
• 2.5.3 Western Blot实验主要试剂配制12-14
• 2.6 实验方法14-23
• 2.6.1 细胞培养14-15
• 2.6.2 慢病毒转染15
• 2.6.3 qRT-PCR检测细胞HELQ mRNA表达水平15-18
• 2.6.4 Western Blot检测细胞HELQ、CHK1、RAD51蛋白的表达水平18-21
• 2.6.5 Transwell invasion实验检测细胞侵袭能力21
• 2.6.6 Wound Healing实验检测细胞迁移能力21
• 2.6.7 CCK8实验检测细胞增殖能力21-22
• 2.6.8 彗星实验检测细胞DNA损伤水平22-23
• 2.7 统计处理23-24
• 第3章 结果24-31
• 3.1 人骨肉瘤细胞与成骨细胞中HELQ m RNA表达情况24
• 3.2 人骨肉瘤细胞与成骨细胞中HELQ蛋白表达情况24-26
• 3.3 HELQ对人骨肉瘤U2-OS和 143B细胞侵袭能力的影响26-27
• 3.4 HELQ对人骨肉瘤 143B和U2-OS细胞迁移能力的影响27-28
• 3.5 HELQ对人骨肉瘤 143B和U2-OS细胞增殖能力的影响28
• 3.6 HELQ对人骨肉瘤 143B和U2-OS细胞DNA损伤水平的影响28-29
• 3.7 HELQ对CHK1-RAD51信号通路的影响29-31
• 第4章 讨论31-34
• 第5章 结论与展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-39
• 攻读学位期间的研究成果39-40
• 综述 DNA损伤修复与肿瘤发生发展的研究进展40-44
• 参考文献44

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8 楼列名;吴兴;顾昕;刘珊林;;锰型超氧化物歧化酶基因转染对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用[J];上海医学;2007年06期

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10 吴进;杨彤涛;甘璐;周勇;;电压门控性钾离子通道对人骨肉瘤细胞增殖的影响[J];科学技术与工程;2009年16期

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4 何焕玲;左国伟;赖天霞;王嫣;陈小菊;李星星;苗静琨;谭启华;寇小琴;周兰;;骨形态发生蛋白-2和-6对人骨肉瘤细胞U2OS作用的研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

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本文编号：490106