miR-92a在前列腺癌中的表达及意义

发布时间：2017-06-27 22:10

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【摘要】：目的了解miRNA-92a在前列腺癌组织及细胞系中的表达水平,探讨miRNA-92a异常表达对前列腺癌细胞生物学行为的影响,并对其可能的分子机制进行探索。方法收集天津市泌尿外科研究所保存的接受前列腺癌根治性切除术的100例前列腺癌(Pca)患者组织标本及行TUR-P的60例良性前列腺增生(BPH)患者的样本组织,分别提取总RNA,进一步RT-qPCR方法检测在Pca和BPH组织中miRNA-92a的表达水平,并对其检测结果进行统计分析。选取天津市泌尿外科研究所前列腺疾病研究室冻存的各种前列腺癌细胞系和正常前列腺上皮细胞系,包括PC3、C4-2和LNCaP 3种前列腺癌细胞系以及RWPE-1 1种正常前列腺上皮细胞系。分别提取总RNA,进一步RT-qPCR方法检测并验证在PC3、C4-2、LNCaP及RWPE-1四种细胞系中miRNA-92a的表达水平,并对检测结果进行统计学分析。通过在前列腺癌细胞系内转染miRNA-92a mimic、miRNA-92a inhibitor及其对照,并检测细胞的增殖能力、凋亡和周期的变化。利用生物信息学方法,选取miRanda、TargetScan、PicTar3种靶基因预测软件均可测到的交集基因,进一步在Search miRò中预测与疾病相关性,从而初步筛选出可能与肿瘤相关的靶基因,并通过RT-qPCR方法检测各靶基因mRNA的表达水平。从而探讨异常表达的miRNA-92a在前列腺癌发生、发展中的作用。结果与良性前列腺增生组织相比,miR-92a在前列腺癌组织中的mRNA相对表达水平显著增高,且差异具有统计学意义(P0.01)。通过RT-PCR方法检测人正常前列腺上皮细胞系RWPE-1和三种前列腺癌细胞系(PC3、LNCap、C4-2)中miRNA-92a的表达,发现在PC3细胞系中miRNA-92a的表达量相对其它细胞系明显上调。利用Lipo2000转染miRNA-92a mimic和miRNA-92a inhibitor及其阴性对照至PC3细胞系,提取转染24小时后细胞RNA,行RT-PCR检测,结果显示miRNA-92a mimic和miRNA-92a inhibitor转染PC3细胞后,能较明显上调及下调miRNA-92a的表达水平。在PC3细胞内转染miRNA-92a mimic、miRNA-92a inhibitor及其对照后,发现在上调miRNA-92a的表达后能显著提高细胞的增殖能力,反之下调其表达后细胞的增殖能力受到抑制;上调miRNA-92a的表达后PC3细胞的凋亡率明显低于其阴性对照组,而下调其表达后细胞的凋亡率要高于其阴性对照组;上调miRNA-92a的表达能够促进细胞从G0/G1期进入S期,而下调mi RNA-92a后,细胞在G0/G1期较对照组明显阻滞,并伴随S期细胞减少。利用生物信息学方法,选取miRanda、TargetScan、PicTar3种靶基因预测软件均可测到的交集基因共210个,进一步在Search miRò中预测与疾病相关性筛选出可能与肿瘤相关的靶基因10个(IRS2、MTA3、BACH1、FASLG、EBAG9、SMAD7、PTK2、POLK、EZH2、FLI1)。结论前列腺癌组织中miRNA-92a水平显著高于良性前列腺增生组织;前列腺癌细胞系LNCap、C4-2和PC-3中mi RNA-92a水平显著高于正常前列腺细胞RWPE-1;mi RNA-92a高表达后可显著提高PC-3细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡,并可促进细胞从G0/G1期进入S期;而miRNA-92a低表达可显著降低细胞增殖能力,促进细胞凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期;miRNA-92a在前列腺癌的发生、发展中发挥着类似癌基因的作用,随着研究的不断深入,寻找到其直接作用的靶基因,将来必能对其复杂的调控机制进行更全面的阐述。
【关键词】：前列腺癌 miR-92a 生物学行为 RT-qPCR
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略语/符号说明9-10
• 前言10-14
• 研究现状、成果10-13
• 研究目的、方法13-14
• 对象和方法14-30
• 结果30-40
• 讨论40-43
• 结论43-44
• 参考文献44-46
• 发表论文和参加科研情况说明46-47
• 综述47-60
• 参考文献55-60
• 致谢60

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本文编号：491425