沉默UBC9对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

发布时间：2017-06-28 00:09

  本文关键词：沉默UBC9对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzymes 9,UBC9)在肝癌细胞中的表达,并采用shRNA方法研究下调UBC9后的肝癌细胞增殖、凋亡的改变及其可能的机制。方法:1、采用蛋白印迹(Western Blot)技术检测人肝癌细胞株HepG2、LM3、MHCC97h、Huh7、SMMC-7721中UBC9的表达。2、设计并合成针对UBC9的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒,采用阳离子脂质体技术进行瞬时转染。实验设置正常肝癌细胞组、脂质体组、空载质粒(NC-shRNA)组以及目的质粒(UBC9-shRNA)组。3、采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real Time-PCR,qRT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)技术分别检测各组细胞UBC9在转染前后mRNA及蛋白水平的表达。4、采用CCK8法检测转染前后肝癌细胞增殖能力的变化,通过Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测转染前后肝癌细胞凋亡的变化。5、采用蛋白印迹(Western Blot)技术检测各组细胞中Bcl-2以及NF-κB p65蛋白表达水平的改变。结果:1、在HepG2、LM3、MHCC97h、Huh7、SMMC-7721这5种肝癌细胞株中UBC9蛋白表达均呈阳性高表达,UBC9表达量最高的是MHCC97h、最低的是LM3,HepG2、SMMC-7721、Huh7这3中细胞中UBC9表达量没有统计学差异。2、目的质粒UBC9-shRNA转染肝癌细胞24h及48h后,UBC9在mRNA水平(24h)以及蛋白水平(48h)相比较正常肝癌细胞组、脂质体组及空载质粒组均下降。3、CCK8法显示UBC9-shRNA组肝癌细胞的增殖能力明显下降,流式细胞仪显示UBC9-shRNA组肝癌细胞的凋亡水平最高。4、Western Blot技术显示,相比较正常肝癌细胞组、脂质体组及NC-shRNA组,UBC9-shRNA组中Bcl-2蛋白水平明显下降,NF-κB p65蛋白水平下降。结论:1、在肝癌细胞中UBC9为阳性高表达,本实验旨在研究肝癌细胞增殖与凋亡的变化,故选取HepG2肝癌细胞做后续实验。2、目的质粒UBC9-shRNA能够下调肝癌细胞中UBC9的表达,下调UBC9后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞的凋亡增加。3、下调UBC9后,可能通过Bcl-2调节肝癌细胞的凋亡改变,可能通过NF-κB p65调节肝癌细胞增殖的改变。
【关键词】：UBC9 肝癌 shRNA 增殖 凋亡
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料与方法12-24
• 2.1 实验所需材料12-16
• 2.1.1 细胞株12
• 2.1.2 主要试剂12-13
• 2.1.3 主要设备13-14
• 2.1.4 主要试剂配制14-16
• 2.2 实验方法16-24
• 2.2.1 UBC9在肝癌细胞的表达16-18
• 2.2.2 shRNA设计、实验分组及细胞转染18-20
• 2.2.3 qRT-PCR、Western Blot分别检测转染后各组UBC9 mRNA和蛋白水平的表达。20-22
• 2.2.4 CCK8法检测定UBC9对肝癌细胞的增殖作用22
• 2.2.5 流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率22
• 2.2.6 沉默UBC9对NF-κB p65蛋白及Bcl-2 蛋白表达的影响22-23
• 2.2.7 统计学方法23-24
• 第3章 实验结果24-30
• 3.1 UBC9在5种不同肝癌细胞株中的表达24
• 3.2 转染shRNA后UBC9在HepG2中mRNA及蛋白水平都下调24-26
• 3.2.1 转染效果24-25
• 3.2.2 转染shRNA后UBC9在HepG2中mRNA水平下调25
• 3.2.3 转染shRNA后UBC在HepG2中蛋白水平下调25-26
• 3.3 下调UBC9能够抑制HepG2细胞增殖能力26-27
• 3.4 下调UBC9能够促进HepG2细胞凋亡27-28
• 3.5 下调UBC9对HepG2细胞中凋亡蛋白Bcl-2 影响28
• 3.6 下调UBC9对HepG2细胞中NF-κB p65的影响28-30
• 第4章 讨论30-32
• 第5章 结论与展望32-33
• 5.1 结论32
• 5.2 展望32-33
• 致谢33-34
• 参考文献34-36
• 攻读学位期间的研究成果36-37
• 综述37-46
• 参考文献44-46

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 蒋小玲,邓欣,聂广,杨大国;剔毒护肝方及其拆方对人肝癌细胞增殖及端粒酶活性的影响[J];中西医结合肝病杂志;2004年02期

2 孙宏伟;沈锋;吴孟超;;瞬时受体势C可能存在介导肝癌细胞增殖的作用[J];肿瘤;2006年04期

3 田文礼;赵亚周;彭文君;;蜂胶对肝癌细胞增殖及其脂肪沉积的影响[J];食品科学;2012年09期

4 杨春;陈文;钟晓琳;王忠琼;陈枫;夏纪毅;;丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞增殖的影响[J];山东医药;2012年32期

5 王静;宗瑞强;莫艳波;田国华;郝礼森;张国志;;无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究[J];中国煤炭工业医学杂志;2014年04期

6 康九红,魏亚明,郑荣梁;二乙基二硫代氨基甲酸钠对人肝癌细胞增殖、再分化与凋亡的作用(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;2001年09期

7 胡辉,荆绪斌,蔡先彬;过氧化氢在乙醇抑制肝癌细胞增殖中的作用[J];临床消化病杂志;2005年03期

8 史冬梅;马天乐;涂水平;谭继宏;乔敏敏;章永平;江石湖;;X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1抑制肝癌细胞增殖和诱导凋亡的实验研究[J];中华消化杂志;2006年10期

9 赵新;;儿茶素抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡作用研究[J];中国现代医学杂志;2012年10期

10 王迎春;刘炎芳;邢兰花;杨旭;李小欢;;曲古抑菌素A对人肝癌细胞增殖凋亡影响及其机制的探讨[J];中华肿瘤防治杂志;2013年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 徐艳敏;钱程;;低浓度阿霉素促进肝癌细胞增殖[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年

2 田晶;周士胜;陶凌;董玲;杨安钢;;尼氟灭酸对肝癌细胞增殖的影响[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

3 秦敏;白文元;谭莉莉;;白藜芦醇抑制人肝癌细胞增殖与促进其凋亡的作用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

4 钟宁;董明;程宝泉;张尚忠;李延青;;大蒜素和阿霉素对裸小鼠皮下移植肝癌细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

5 陶立平;陶佳南;陶富山;;宽带中远红外线辐射对肝癌细胞增殖细胞核抗原的研究[A];第八届全国红外加热暨红外医学发展研讨会论文及论文摘要集[C];2001年

6 刘珊林;;抗氧化干预对肿瘤生长和肝癌细胞增殖的抑制作用研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

7 高金亭;郑树森;梁廷波;吴丽花;余松峰;金晶;吴李鸣;徐世国;;环孢素A和他克莫司联合表阿霉素对肝癌细胞增殖、凋亡的影响[A];2005年浙江省器官移植学术会议论文汇编[C];2005年

8 高金亭;郑树森;梁廷波;吴丽花;余松峰;金晶;吴李鸣;徐世国;;环孢素A和他克莫司联合表阿霉素对肝癌细胞增殖、凋亡的影响[A];2005年浙江省外科学术会议论文汇编[C];2005年

9 任开环;邵荣光;;MR-1基因功能研究:促进肝癌细胞增殖、粘附和迁移[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年

10 巴一;吴雄志;谢广茹;陈丹;王伟;;守宫硫酸多糖对人肝癌细胞增殖与分化的影响[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 何德功;日发现致肠癌和肝癌细胞增殖的酶[N];中国劳动保障报;2004年

2 ;乙型肝炎病毒x蛋白对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 杨思俊;癌基因RMP与抑癌基因PTEN的相互拮抗作用及其对肝癌细胞增殖的影响[D];苏州大学;2015年

2 马孝明;MY06在肝癌细胞增殖及侵袭转移中的作用及机制研究[D];苏州大学;2015年

3 王贵明;SOX18基因对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭作用的研究[D];山西医科大学;2016年

4 崔静;ARK5在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响[D];郑州大学;2016年

5 黄健;1,25-二羟维生素D3下调HDAC2抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡的作用及机制研究[D];贵州医科大学;2016年

6 周彦明;曲格列酮抑制肝癌细胞增殖及其作用机制的实验研究[D];第二军医大学;2007年

7 崔越宏;17AAG对肝癌细胞增殖转移的抑制及其机制的研究[D];复旦大学;2011年

8 魏双;Ku80分子对人肝癌细胞增殖的影响及其机制的研究[D];华中科技大学;2011年

9 孙慧燕;Hsa-miR-486-5p抑制肝癌细胞增殖及侵袭的作用及机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年

10 路欣;HSD17B4促进肝癌细胞增殖及其机制的研究[D];河北医科大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨海洋;钙通道蛋白STIM1&Orai1对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭作用的初步研究[D];福建医科大学;2015年

2 彭云云;NLRC5靶向Wnt/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的功能及机制研究[D];安徽医科大学;2015年

3 黄道斌;葡萄糖调节蛋白78对肝癌细胞增殖、自噬及体外血管生成的影响[D];南昌大学医学院;2015年

4 周勇;TLR4调控肿瘤增殖相关蛋白CDK4、CDK6对HBV相关性肝癌细胞增殖的作用[D];南昌大学医学院;2015年

5 严晓娣;shRNA干预IGF-I受体活化对肝癌细胞增殖抑制及其分子机制研究[D];南通大学;2014年

6 吴国慧;Wnt10b基因失活对人肝癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的影响[D];桂林医学院;2015年

7 代航;MicroRNA-30a-5p对肝癌细胞增殖凋亡及侵袭转移的实验研究[D];重庆医科大学;2015年

8 李凤霞;Myrothecine A通过miR-221调控肝癌细胞增殖及树突状细胞成熟机制的研究[D];扬州大学;2015年

9 肖泽林;乙肝病毒X蛋白通过SPHK1促进肝癌细胞增殖的作用及其分子机制的研究[D];南开大学;2015年

10 武承凤;MIF通过ERK信号通路对肝癌细胞增殖的实验研究[D];甘肃中医药大学;2016年

  本文关键词：沉默UBC9对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：491765