抑制人SOST基因表达的腺病毒构建及其对间接共培养体系中MG-63细胞的影响

发布时间：2017-06-28 10:14

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【摘要】：目的构建靶向抑制人骨硬化蛋白SOST的siRNA腺病毒,探究SOST基因在乳腺癌骨质破坏这一病理过程中的作用。方法1.设计带3个干扰片段的2对引物,扩增出两段PCR产物,以Gibson DNA Assembly的方式同时连接到腺病毒穿梭质粒pAdTrace-OK上。穿梭载体经与腺病毒骨架质粒同源重组,获得腺病毒质粒。该质粒再经HEK-293细胞包装获得SOST-siRNA腺病毒。以该病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR、ELISA检测其干扰效率。2.将MG-63成骨细胞与MDA-MB-231细胞间接共培养,以模拟乳腺癌细胞骨转移,同时采用Ad-siSOST腺病毒抑制MDA-MB-231细胞相应蛋白表达,检测MG-63细胞成骨能力的改变。结果1.成功获得带三个干扰片段的腺病毒穿梭质粒,经同源重组和包装后,获得腺病毒AdR-siSOST。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,能够明显抑制SOST的表达。2.与MDA-MB-231细胞共培养后,MG-63细胞成骨能力下降,说明在乳腺癌骨转移的微环境中,乳腺癌细胞可抑制成骨细胞的成骨分化;转染Ad-siSOST腺病毒后,其成骨能力好转,说明在这一过程中有SOST基因的参与。结论1.成功构建具有较高干扰效率的腺病毒AdR-siSOST。2.sclerostin蛋白参与了乳腺癌骨转移,阻断SOST的表达,可有效改善乳腺癌引起的骨质破坏。
【关键词】：SOST 腺病毒 乳腺癌 骨转移
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 参考文献9-11
• 第一节“一步法”快速构建干扰人SOST基因RNA表达的腺病毒11-26
• 1 实验材料11-12
• 2 实验方法12-21
• 3 实验结果21-23
• 4 讨论23-24
• 参考文献24-26
• 第二节 AD-SISOST腺病毒对间接共培养体系中MG-63 细胞的影响26-34
• 1 实验材料26
• 2 实验方法26-28
• 3 实验结果28-30
• 4 讨论30-32
• 参考文献32-34
• 总结34-35
• 文献综述35-43
• 参考文献39-43
• 致谢43-44
• 攻读硕士期间发表论文44

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本文编号：493473