microRNA-100抑制剂慢病毒表达载体的构建及其对BEAS-2B细胞行为学的影响

发布时间：2017-06-28 11:19

  本文关键词：microRNA-100抑制剂慢病毒表达载体的构建及其对BEAS-2B细胞行为学的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【研究背景及目的】肿瘤的发生是一个复杂的过程,我们实验室一直致力于肿瘤发病机制与干预的研究。mi RNAs(micro RNA,mi RNA,mi R)在肿瘤发生中的作用是近年来关注的热点,我们前期的研究中用mi RNAs芯片杂交分析经过As2O3急性诱导的SHP2+/+野生型和SHP2D61G/+突变的MEFs中mi RNAs表达谱的变化。结果发现,在数十种表达有差异的mi RNAs中,mi R-100的表达是递减的。而SHP2D61G/+突变的MEF细胞发生了恶性转化,并且用As2O3诱导后,细胞的恶性行为更加明显,由此我们推测,mi R-100参与了细胞的恶性转化过程,于是我们进一步研究mi R-100的作用。近年来,mi R-100与肿瘤关系的研究也有了新的进展。研究发现,mi R-100在一些肿瘤中如前列腺癌中的表达是升高的,并且促进前列腺癌的转移,发挥着促癌基因的作用;而在另一些肿瘤中,如宫颈癌、膀胱癌、肺癌中呈现低表达,发挥着类似于抑癌基因的作用。有人研究发现,用低剂量的砷长期慢性诱导人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞后,细胞的增殖和生长能力增加,发生了一定程度的恶性转化,同时研究也发现,长期的砷暴露也增加了肺癌的发生风险,因此mi R-100与砷都和肺癌的关系密切。于是我们选择人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞作为研究对象,研究mi R-100对BEAS-2B细胞行为学的影响。慢病毒具有感染效率高、感染谱广、稳定表达且安全性高的优点,可以将目的基因导入细胞并稳定的表达。因此,我们拟通过构建mi R-100抑制剂的慢病毒载体并稳定感染BEAS-2B细胞,研究沉默mi R-100表达对BEAS-2B细胞行为学的影响,为进一步研究mi R-100的功能奠定基础。【研究方法】1.构建mi R-100抑制剂的慢病毒表达载体并稳定感染BEAS-2B细胞。2.用RT-PCR的方法检测慢病毒感染后的BEAS-2B细胞中mi R-100的表达。3.用MTT实验和克隆形成实验来检测慢病毒感染的BEAS-2B细胞生长情况;用软琼脂集落形成试验来检测细胞的非依赖生长能力;4.用粘附试验和Transwell迁移实验来检测细胞的粘附能力和体外迁移能力。【研究结果】1.成功的构建了mi R-100抑制剂的慢病毒表达载体并稳定感染BEAS-2B细胞株。2.慢病毒感染的BEAS-2B中mi R-100的表达被明显的抑制。3.MTT实验和克隆形成实验结果显示,抑制mi R-100的表达后,BEAS-2B细胞生长增殖能力有所增加。4.抑制BEAS-2B细胞中mi R-100的表达后,细胞的锚定非依赖生长能力增强,形成了较大的集落。5.粘附试验和Transwell迁移实验结果表明,抑制mi R-100的表达后,BEAS-2B细胞的粘附和体外迁移能力有一定程度的增强。【研究结论】1.通过mi R-100抑制剂慢病毒载体稳定感染BEAS-2B细胞,成功的抑制了BEAS-2B细胞中mi R-100的表达。2.抑制mi R-100的表达,促进了BEAS-2B细胞的增殖、生长和迁移能力。
【关键词】：miR-100抑制剂 慢病毒载体 BEAS-2B细胞
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.2
【目录】：

• 中英文缩写一览表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-33
• 讨论33-36
• 结论36
• 参考文献36-42
• 附录42-43
• 致谢43-44
• 综述44-51
• 参考文献47-51

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1 董伟;microRNA-100抑制剂慢病毒表达载体的构建及其对BEAS-2B细胞行为学的影响[D];安徽医科大学;2015年

  本文关键词：microRNA-100抑制剂慢病毒表达载体的构建及其对BEAS-2B细胞行为学的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：493667