低氘水对人非小细胞肺癌细胞A549生长抑制作用及其相关机制的初步研究

发布时间：2017-06-28 20:19

  本文关键词：低氘水对人非小细胞肺癌细胞A549生长抑制作用及其相关机制的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究低氘水对非小细胞肺癌细胞A549的生长抑制作用及其相关机制。方法:体外细胞实验利用MTT法检测50ppm低氘水对A549细胞增殖的抑制作用;体内分别建立裸鼠A549皮下移植瘤和原位移植瘤模型,观察低氘水对裸鼠瘤体的影响。建模结束后,通过实体瘤观察和HE组织染色,比较裸鼠肺组织的变化以及低氘水对皮下和原位移植瘤瘤体的影响。转录组测序(RNA-seq)技术检测A549细胞内基因表达情况。通过Gene Ontology对差异表达基因进行功能聚类和生物学途径识别。最后利用气质联用的代谢组学研究方法,比较荷瘤裸鼠血清中代谢物的差异。结果:MTT实验表明,使用低氘水处理A549细胞5d和10d后均出现显著的细胞生长抑制。裸鼠体内A549皮下移植瘤结果显示,低氘水组裸鼠瘤体生长缓慢。裸鼠A549原位移植瘤结果表明,对照组肺组织上产生多个瘤体,分布密集,严重挤压肺组织,造成肺组织畸形。而低氘水组裸鼠肺组织上仅有少数瘤体,肺组织形状保持相对正常。肺组织HE染色表明,低氘水组肺组织中的肿瘤病灶明显比对照组小。转录组测序(RNA-seq)分析了对照组、50ppm-5d和50ppm-10d的A549基因表达情况。找到与增殖密切相关的差异表达基因有KRT18、ANGPTL、FTH1、EGFR、GREM1、CAV1等;与凋亡密切相关的差异表达基因有BAX、CDKN1A、IER3、PEA15、DNAJB9、EGFR等。通过GO-BP聚类分析,发现并集差异表达基因可信度最高的功能聚类为血管生成(p=2.8×10-12),其中包括ITGAV、COL4A2、ID1、ANGPTL4、SERPINE、EPHA2等差异表达基因。基于气质联用的代谢组学方法研究了裸鼠血清中的差异代谢物。主成分分析PCA得分图结果表明,C与D组血清代谢物无明显差异;C与LC组、D与LD组比较其血清代谢物都有明显差异;而LC与LD组血清代谢物的比较,部分样本出现聚集。利用PLS-DA使LC和LD组样本点出现明显聚类,找到对分组贡献大的18种代谢物,多为氨基酸和糖类。结论:低氘水能显著抑制A549细胞增殖;低氘水能显著抑制裸鼠A549皮下移植瘤和原位移植瘤的生长。差异表达基因功能聚类提示低氘水在体内很有可能通过影响移植瘤的血管生成达到抑制细胞增殖的目的。代谢组学分析表明,低氘水对原位移植瘤裸鼠代谢的影响主要表现为血清代谢物中糖类物质含量的降低。
【关键词】：低氘水、非小细胞肺癌细胞A549 皮下移植瘤 原位移植瘤 转录组测序
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-10
• 第一章 前言10-17
• 1.1 癌症及其发生趋势10-11
• 1.2 肺癌11-12
• 1.2.1 肺癌及其发生趋势11
• 1.2.2 肺癌的病理分类及其发生因素11-12
• 1.3 肺癌的治疗手段12-14
• 1.3.1 手术治疗12-13
• 1.3.2 放射治疗13
• 1.3.3 化学药物治疗13
• 1.3.4 分子靶向治疗13-14
• 1.4 低氘水14-16
• 1.4.1 低氘水的生物学效应14-15
• 1.4.2 氘的作用机制15-16
• 1.5 展望16-17
• 第二章 低氘水对A549细胞增殖的影响17-22
• 2.1 材料17-18
• 2.1.1 试剂和仪器17-18
• 2.2 方法18-21
• 2.2.1 F12K培养基配制18-19
• 2.2.2 A549细胞培养19-20
• 2.2.3 MTT法检测A549细胞增殖活性20-21
• 2.2.4 数据处理21
• 2.3 结果21
• 2.4 本章小结21-22
• 第三章 低氘水对裸鼠A549移植瘤的影响22-31
• 3.1 低氘水对裸鼠A549皮下移植瘤的影响22-24
• 3.1.1 材料和方法22
• 3.1.2 裸鼠A549皮下移植瘤模型的构建22-23
• 3.1.3 皮下移植瘤瘤体测量及分析23
• 3.1.4 结果23-24
• 3.2 低氘水对裸鼠A549原位移植瘤的影响24-30
• 3.2.1 材料和方法24-25
• 3.2.2 裸鼠A549原位移植瘤模型的构建25
• 3.2.3 裸鼠A549原位移植瘤肺组织HE病理染色25-26
• 3.2.4 结果26-30
• 3.3 本章小结30-31
• 第四章 转录组测序技术检测低氘水对A549细胞基因表达的影响31-42
• 4.1 材料和方法31-32
• 4.1.1 材料31
• 4.1.2 方法31-32
• 4.2 结果32-40
• 4.2.1 增殖相关基因分析33-35
• 4.2.2 凋亡相关基因分析35-37
• 4.2.3 Gene Ontology分析37-40
• 4.3 本章小结40-42
• 第五章 基于气质联用的肺癌血清代谢组学研究42-50
• 5.1 材料和方法43-44
• 5.1.1 试剂和仪器43
• 5.1.2 方法43-44
• 5.2 结果44-49
• 5.2.1 普通水健康裸鼠组（C）和低氘水健康裸鼠组（D）的PCA结果44-45
• 5.2.2 普通水健康裸鼠组（C）和有瘤普通水裸鼠组（LC）的PCA结果45-46
• 5.2.3 低氘水健康裸鼠组（D）和低氘水有瘤裸鼠组（LD）的PCA结果46
• 5.2.4 普通水有瘤裸鼠组（LC）和低氘水有瘤裸鼠组（LD）的PCA结果46-49
• 5.3 本章小结49-50
• 第六章 总结与展望50-52
• 6.1 总结50-51
• 6.2 展望51-52
• 参考文献52-57
• 致谢57-58
• 攻读硕士学位期间已发表的论文58-60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨柯君;;全球癌症状况最新数据更新[J];上海医药;2014年02期

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本文编号：495136