RNA结合蛋白QKI抑制肾透明细胞癌演变的机制探究

发布时间：2017-06-29 13:14

  本文关键词：RNA结合蛋白QKI抑制肾透明细胞癌演变的机制探究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)简称肾癌,是起源于肾小管上皮的恶性肿瘤,占肾脏恶性肿瘤的80%-90%。肾癌约占成人恶性肿瘤的2%-3%,世界各国各地区肾癌的发病率差异明显,发达国家发病率高于发展中国家,我国各地区肾癌的发病率及死亡率差异也较大。肾癌的病因未明。其发病与遗传,吸烟,肥胖,高血压等危险因素相关,遗传性肾癌或家族性肾癌占肾癌总数的2%-4%。染色体3p25-26的VHL基因与肾透明细胞癌的发生有密切关系。目前,肾癌的治疗主要是手术,放化疗,免疫治疗和靶向治疗,但是这些方法对于某些晚期和转移性肾癌患者收效甚微。因此,我们急需要发现新的治疗和诊断肾透明细胞癌的靶点,以达到早发现早治疗的目的,从而延长患者的生存时限并且提高患者的生存质量。HIF-1α是低氧诱导因子HIF(hypoxia inducible factor)家族的一员,是由编码红细胞生成素的基因发现低氧调控区域HRE而得来的。HIF-1α在低氧条件下与HIF-1β结合形成异源二聚体并且转移进入细胞核,从而调控下游靶基因表达。研究证实HIF-1α可促进多种肿瘤细胞增殖,转移和血管生成。HIF是肾透明细胞癌中VHL信号通路的重要组成部分,其中HIF-1α过表达诱导的血管生成时肾透明细胞癌发生机制的重要环节并且导致较差的临床治疗效果。RNA结合蛋白QKI是信号转导和激活家族(STAR家族)成员之一。qki基因可以编码多种蛋白,主要有三种亚型QKI-5、QKI-6和QKI-7。以往的研究表明QKI在神经系统发育中发挥重要作用。我们实验室的研究也表明,QKI促进了结肠上皮,巨噬细胞和肌肉细胞的分化过程。同时QKI在胃癌,前列腺癌和舌癌中还扮演着抑癌基因的角色。基于以上研究,本课题意在探讨QKI在肾癌发生发展中的作用,能否作为诊断,治疗和预后的潜在靶点。目的:1)利用肾透明细胞癌以及匹配的癌旁临床组织样本,检测RNA结合蛋白QKI的表达量是否存在差异,同时在肿瘤细胞系和正常细胞中检测QKI表达是否存在差异。2)观察过表达和干涉QKI对肿瘤细胞增殖凋亡以及周期的影响3)在上述功能变化的基础上,进一步探索RNA结合蛋白QKI发挥上述作用的分子机制。4)最后通过组织芯片技术收集肾透明细胞癌组织并进行免疫组化半定量和统计学分析,探讨RNA结合蛋白QKI与患者的分级分期以及生存时间是否存在相关性。方法和结果:1)针对肾癌临床样本的免疫组织化学染色结果表明,QKI在肾透明细胞癌中的表达量低于癌旁组织;并且QKI的表达水平与肾癌的恶性程度呈负相关:对肿瘤组织以及癌旁组织进行Western Blot检测结果显示,肾癌患者的癌旁组织中QKI的表达水平明显高于肿瘤组织。同时,我们通过RT-PCR和Western Blot在细胞水平检测QKI的表达,结果显示QKI的表达趋势与组织水平相一致。2)MTT结果显示,过表达QKI使786-0和Caki-1细胞增殖受到抑制;流式细胞术结果显示,过表达QKI使786-0和Caki-1细胞凋亡率增加。RT-PCR和Westernblot结果显示过表达QKI使周期相关蛋白cyclin D1表达降低,而p27表达增高;流式细胞术结果显示,过表达QKI后786-0和Caki-1肿瘤细胞中S期细胞比例降低。同时,干涉QKI后与过表达结果相反。3)RT-PCR和Western Blot结果显示,在低氧(5%)和常氧(20%)条件下,过表达QKI使低氧诱导因子HIF-1α表达均受到抑制;RT-PCR结果显示,在同样的条件下,HIF-1α下游靶基因GLUT-1,VEGF,PGK-1表达同样受到抑制;同时,在干涉QKI后得到与过表达结果相反。RT-PCR结果显示,在过表达QKI的同时使用si-RNA-HIF-1α干涉掉HIF-1α后,其下游靶基因变化趋势不再明显。4)对肾癌临床样本进行免疫组化染色,并对染色结果进行半定量分析,以25%阳性率为界值点,将QKI表达分为低表达(≤25%)和高表达(25%)。通过统计学分析,QKI高表达与肿瘤分级呈负相关,而与分期无明显相关性,QKI高表达的患者生存率明显高于QKI低表达患者。结论:通过实验研究,我们首次发现了RNA结合蛋白QKI在肾透明细胞癌中发挥着抑癌的作用。我们发现QKI在临床肾癌肿瘤组织中表达下调,并且QKI的表达水平与肿瘤的分级呈负相关,与患者的生存期呈正相关;细胞实验表明,过表达QKI能够抑制肾癌细胞的增殖,促进肿瘤细胞的凋亡以及抑制肿瘤细胞周期;同时,过表达QKI能够抑制低氧诱导因子HIF-1α表达,进而影响HIF-1α的下游促血管生成和糖代谢的相关靶基因VEGF,GLUT-1,PGK-1的表达。通过上述作用RNA结合蛋白QKI抑制了肾透明细胞癌的发生和发展。为QKI成为肾透明细胞癌独立的预后指标的治疗靶点提供了理论基础。
【关键词】：RNA结合蛋白QKI 肾透明细胞癌 低氧诱导因子HIF-1α 增殖和凋亡
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 文献回顾16-26
• 实验一 RNA结合蛋白QKI在肾透明细胞癌中的表达变化26-37
• 1 材料26-27
• 2 方法27-31
• 3 结果31-35
• 4 讨论35-37
• 实验二 QKI对肾透明细胞癌生物学行为的影响37-53
• 1 材料37-38
• 2 方法38-41
• 3 结果41-51
• 4 讨论51-53
• 实验三 QKI通过调控HIF-1Α 表达的方式抑制肾透明细胞癌发展53-64
• 1 材料53-54
• 2 方法54-57
• 3 结果57-62
• 4 讨论62-64
• 实验四 QKI与肾癌患者临床数据的相关性分析64-70
• 1 材料64
• 2 方法64-65
• 3 结果65-68
• 4 讨论68-70
• 小结70-72
• 参考文献72-77
• 个人简历和研究成果77-78
• 致谢78

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 易仁亮;老年双肾透明细胞癌1例报告[J];实用老年医学;2005年03期

2 杨华,王华庆;肾透明细胞癌的全身治疗现状及进展[J];国外医学.外科学分册;2005年06期

3 李云辉,林华欢;肾透明细胞癌术后远处转移3例[J];广东医学;2005年01期

4 胡蜀雯;刘华丽;;超声诊断以囊性病变为主的肾透明细胞癌1例[J];临床超声医学杂志;2007年03期

5 石泓哲;李长岭;;红色胶状肾透明细胞癌的临床及病理特点——附2例报告[J];癌症进展;2007年06期

6 欧阳可雄;陈伟良;黄志权;李劲松;张树标;;肾透明细胞癌伴下颌骨转移1例报告[J];中国口腔颌面外科杂志;2008年01期

7 祖强;洪宝发;;受体酪氨酸激酶抑制剂对于晚期肾透明细胞癌的靶向治疗作用[J];中国药物应用与监测;2008年02期

8 蓝建发;陈一戎;潘华;史葆光;段国兰;;小窝蛋白-1与血小板反应蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其意义[J];现代泌尿外科杂志;2009年03期

9 赵彦博;李丽;;肾透明细胞癌的螺旋CT表现与病理对照分析[J];中国煤炭工业医学杂志;2011年11期

10 闵钢;王小进;;肾透明细胞癌多层螺旋CT表现及诊断[J];中国临床研究;2012年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘婧;;肾透明细胞癌伴全身转移在全身扩散加权成像的影像规律[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年

2 耿江;方祖军;吴忠;姜昊文;郑捷;丁强;;肾透明细胞癌术后远处转移(附15例报告)[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

3 桂定文;张青汉;;肾透明细胞癌头皮转移一例报告[A];第七次中国中西医结合泌尿外科学术年会暨第二次广东省中西医结合泌尿外科学术年会论文集[C];2009年

4 凌月蓉;叶军;;肾透明细胞癌彩色多普勒超声表现分析[A];中国超声医学工程学会第八届全国腹部超声学术会议论文汇编[C];2010年

5 吴俊;梅长林;赵海丹;戴兵;刘亚伟;;多囊蛋白-1在肾透明细胞癌及常染色体显性多囊肾病患者体液中含量的比较研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

6 柏瑞;欧陕兴;林伟光;;双肾透明细胞癌胰腺转移一例报告[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编（下册）[C];2006年

7 尹森琴;郑勇明;江时忠;朱斌;陈立忠;章明图;;肾透明细胞癌的螺旋CT表现与病理对照研究[A];2007年浙江省放射学学术年会论文汇编[C];2007年

8 毕伟;徐丽伟;徐春媚;董晓秋;;肾透明细胞癌超声造影模式及定量指标分析[A];中国超声医学工程学会第七届全国腹部超声学术会议学术论文汇编[C];2007年

9 徐丽伟;徐春媚;毕伟;董晓秋;;肾透明细胞癌超声造影模式与其病理分化程度的相关性[A];中国超声医学工程学会第七届全国腹部超声学术会议学术论文汇编[C];2007年

10 郑宇朋;;肾透明细胞癌三次转移至鼻腔[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 张中桥;Survivin在肾透明细胞癌中起重要作用[N];中国医药报;2006年

2 王茜;隐瞒病情可能更会吓坏患者,好心态是良药[N];新华每日电讯;2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 赵作辉;肾透明细胞癌的蛋白质组学研究[D];山东大学;2015年

2 王晖;肾透明细胞癌硬脂酰辅酶A去饱和酶I对AKT信号通路的调控机制的研究[D];上海交通大学;2014年

3 董德鑫;磁珠联合MALDI-TOF MS技术在肾透明细胞癌血清和尿液差异蛋白的研究[D];中国协和医科大学;2010年

4 蒋照辉;色素上皮衍生因子在肾透明细胞癌中的表达及影响[D];复旦大学;2010年

5 熊祖泉;肾透明细胞癌及癌旁组织转录组差异表达的初步分析[D];复旦大学;2012年

6 宫方超;微阵列比较基因组杂交技术研究肾透明细胞癌的基因组异常[D];吉林大学;2013年

7 杨轶凡;水通道蛋白1、2、3在肾透明细胞癌中的表达及意义[D];吉林大学;2007年

8 陈起引;肾透明细胞癌血管内皮生长因子、内皮抑素的表达与超声造影相关性研究[D];天津医科大学;2012年

9 王娜;应用新一代测序技术对肾透明细胞癌转录组的研究[D];吉林大学;2012年

10 张宗亮;Ⅰ：谷氨酰半胱氨酸连接酶在肾透明细胞癌中表达的研究；Ⅱ：原位球形回肠膀胱术的尿动力学研究[D];山东大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 秦杰;肾透明细胞癌3、7、8、9、17号染色体的杂合性缺失研究[D];大连医科大学;2009年

2 丁家宝;E2F1及EGR-1在肾透明细胞癌中的表达及意义[D];河北医科大学;2015年

3 郭岩松;ERCC1在肾透明细胞癌中的表达及其意义[D];河北医科大学;2015年

4 朱鑫;HDAC1及E2F1在肾透明细胞癌中的表达及意义[D];河北医科大学;2015年

5 赵辉;DECT皮髓早期增强序列图像对肾透明细胞癌的诊断价值[D];宁夏医科大学;2015年

6 魏晋艳;能谱CT成像在肾透明细胞癌术前分级评估 中的价值研究[D];兰州大学;2015年

7 高裕;CREPT在肾透明细胞癌的作用机制研究[D];宁夏医科大学;2015年

8 王鹏;紧密连接蛋claudin-4在肾透明细胞癌中的表达及其预后意义[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

9 牛少曦;miR-223在肾透明细胞癌中的表达和作用[D];中国人民解放军医学院;2015年

10 李金涛;肿瘤干细胞ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义[D];新乡医学院;2015年

  本文关键词：RNA结合蛋白QKI抑制肾透明细胞癌演变的机制探究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：498018