基于离心芯片的血清中癌胚抗原的含量检测

发布时间：2017-06-30 02:15

  本文关键词：基于离心芯片的血清中癌胚抗原的含量检测，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：癌胚抗原是广泛存在于消化系统癌、乳腺癌、肺癌患者血清中的一种糖蛋白。它是一种广谱性的肿瘤标志物,是目前临床上公认的、具有明确诊断意义的六种肿瘤标志物之一,对血清中癌胚抗原浓度的实时监测,能够更好地监测病情发展以及对药物疗效进行判断。传统的癌胚抗原的检测方法是免疫,多次洗涤分离操作繁琐、费时。本文以离心沉降为原理,首次将壳聚糖作为密度介质,开发了一种一步检测癌胚抗原的方法,即在预储存有密度介质的14个铅笔型通道的圆盘芯片上,一步离心将待测微珠复合物与溶液分离后,直接进行荧光检测,实现了癌胚抗原高通量的快速、便捷检测。文中首先对用微珠代替常规的孔板固相基底的可行性进行了验证。对percoll、右旋糖酐以及壳聚糖三种密度介质的分离效果进行考察,发现2%的壳聚糖溶液的分离效果明显较其他两种的好。接着对不同倾斜角的芯片通道进行筛选,最终选择0°倾斜角的通道进行实验。对于离心所涉及的离心转速、离心时间等参数,文中进行了优化,最终在2500r/min的转速条件下进行2.5min的离心,使待测微珠复合物与溶液完全分离。用所开发的方法对癌胚抗原标准品浓度进行测定,得到癌胚抗原浓度与荧光强度关系的标准曲线,在0.7-22.5ng/mL浓度范围内线性良好(R2=0.993)。最后对32例已知浓度的癌胚抗原血清样品进行检测,并与实际浓度进行比较,发现本实验所用方法得到的检测结果与医院所提供结果无显著性差异,因此本文建立的实验方法在临床生物标记物检测方面具有潜在应用价值。
【关键词】：离心芯片 癌胚抗原 密度介质 荧光检测
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.43
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-9
• 1 文献综述9-25
• 1.1 癌胚抗原9-11
• 1.1.1 癌胚抗原简介9
• 1.1.2 癌胚抗原检测现状9-11
• 1.2 离心微流控11-21
• 1.2.1 离心微流控芯片的制作11-13
• 1.2.2 离心芯片的原理及优点13
• 1.2.3 离心芯片的应用及发展13-21
• 1.3 密度梯度离心21
• 1.4 壳聚糖21-24
• 1.4.1 壳聚糖的理化性质21-22
• 1.4.2 壳聚糖的应用22-24
• 1.5 研究目标24-25
• 2 实验25-35
• 2.1 实验试剂25-26
• 2.2 实验仪器26-27
• 2.3 离心芯片的设计及制作27-29
• 2.3.1 模板的制作27-28
• 2.3.2 PDMS-玻璃芯片的制作28-29
• 2.4 癌胚抗原的检测29-35
• 2.4.1 实验原理29-30
• 2.4.2 实验方法的建立30
• 2.4.3 实验可行性验证30-31
• 2.4.4 微珠表面抗体结合率的测定31
• 2.4.5 芯片通道平行性验证31-32
• 2.4.6 实验条件的筛选及优化32-33
• 2.4.7 癌胚抗原标准品的检测33-34
• 2.4.8 人血清中癌胚抗原的检测34-35
• 3 结果与讨论35-48
• 3.1 实验方法可行性验证35-36
• 3.2 芯片通道平行性验证36
• 3.3 微珠表面蛋白结合率36-37
• 3.4 实验条件的筛选及优化37-41
• 3.4.1 密度介质的筛选37-39
• 3.4.2 通道倾斜角度的优化39
• 3.4.3 离心转速的优化39-40
• 3.4.4 离心时间的优化40-41
• 3.5 癌胚抗原标准品的含量测定41-42
• 3.6 人血清中癌胚抗原含量的测定42-48
• 结论48-49
• 参考文献49-54
• 致谢54-55

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本文编号：500219