二甲双胍在IL-6诱导胃癌细胞EMT中的作用

发布时间：2017-07-01 16:24

  本文关键词：二甲双胍在IL-6诱导胃癌细胞EMT中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景:胃癌是目前人类最常见的消化道恶性肿瘤之一,其死亡率占相关肿瘤死亡率的第二位。现阶段胃癌的发病原因和机制尚未完全清楚,由于早期无较为明显地症状,因此很多病人在前来确诊时就已经有局部或远处的浸润和转移,严重影响肿瘤患者的治疗及预后。上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是一系列生物学过程,是上皮细胞为适应环境而引发的,其特征性表现为上皮细胞向间质细胞转化,在多种恶性肿瘤的侵袭和转移方面都起着至关重要的作用,尤其是上皮细胞来源的消化道肿瘤方面。因此,对EMT过程进行深入探究,不仅为消化系肿瘤的预防和治疗提供方向,也将为消化系肿瘤患者的预后和抗肿瘤药物的应用提供依据。二甲双胍是一种临床上广泛使用的双胍类降糖药物,作为胰岛素增敏剂主要针对2型糖尿病的治疗。大量研究表明,二甲双胍通过细胞能量代谢,细胞周期蛋白以及micro RNA的调节能抑制肿瘤细胞的生长。最新的研究进展提示,二甲双胍能抑制多种恶性肿瘤的EMT进程,从而影响肿瘤进展及预后。本研究通过检测二甲双胍对IL-6诱导的胃癌细胞EMT模型的生长,侵袭迁移能力的改变,相关基因的转录与表达初步探讨二甲双胍对胃癌细胞EMT的影响。目的:探讨双胍类降糖药二甲双胍对IL-6诱导的胃癌细胞SGC7901上皮间质转化的作用。方法:采用IL-6体外刺激的方法培养SGC7901,构建EMT模型,于倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;根据实验目的将SGC7901细胞进行分组,可分为SGC7901-ctr组,SGC7901+M组,SGC7901-IL-6组和SGC7901-IL-6+M组;MTT法检测二甲双胍对细胞增殖的影响;流式细胞术检测二甲双胍对SGC7901细胞周期的影响;细胞划痕修复实验检测二甲双胍对细胞增殖及迁移的影响,RT-PCR及westernblot检测EMT相关的重要标志分子E-cadherin,N-cadherin,Vimentin和Twist1在m RNA和蛋白表达水平上的变化情况。结果:1.倒置显微镜下观察各组实验细胞形态学差异,IL-6能诱导胃癌细胞SGC-7901发生一系列形态学的改变,由典型的上皮细胞样细胞形态向间质细胞样形态转化,多数细胞排列较为松散,形态表现为类似成纤维状,部分细胞呈梭形,纺锤体形,较之普通SGC7901细胞有典型的形态学变化。2.MTT法检测各组实验细胞增殖能力的变化,二甲双胍能显著抑制胃癌细胞SGC7901的增殖促进细胞凋亡,SGC7901-IL-6组较SGC7901-ctr组有明显地生长增殖优势(P0.01),而SGC7901-IL-6+M组较之SGC7901-IL-6组又有生长抑制(P0.01)。3.划痕修复实验比较各实验组细胞迁移能力,在划痕后24h,SGC7901-IL-6组较之SGC7901-ctr组细胞缺口较小;在划痕后48h,SGC7901-IL-6组细胞划痕的缺口已逐渐缩小至接近愈合的状态,而对照组划痕缺口仍比较宽。二甲双胍处理过的SGC7901-IL-6与未处理组相比细胞缺口增大。流式细胞术检测各组实验细胞细胞周期的变化,二甲双胍能显著影响胃癌细胞的周期分布且能明显抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。4.PCR用于检测各实验组细胞EMT相关标志分子m RNA的表达水平,PCR结果显示,与对照组相比,IL-6处理过的SGC7901细胞E-Cadherin m RNA表达明显降低,而N-Cadherin、Vimentin和Twist1 m RNA表达明显增高(P0.01)。与未受二甲双胍处理过的IL-6诱导的7901细胞相比,加用二甲双胍干预的7901(IL-6)细胞E-Cadherin m RNA表达增高,而N-Cadherin、Vimentin和Twist1m RNA表达降低(P0.01)。5.Western blot用于检测各实验组细胞与EMT相关标志分子的蛋白表达水平,结果表明,与对照组相比,IL-6处理过的SGC7901细胞E-Cadherin蛋白表达量明显降低,而N-Cadherin、Vimentin和Twist1蛋白表达量明显增高(P0.05)。二甲双胍作用后E-cadherin蛋白表达量增加,而N-cadherin,Vimentin和Twist1蛋白表达量均降低(P0.05)。结论:1.IL-6能诱导胃癌细胞SGC-7901发生EMT,使细胞的增殖和迁移能力增强,EMT相关标志分子的表达水平发生相应变化。2.双胍类降糖药二甲双胍能明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和侵袭能力,同时抑制肿瘤细胞的EMT过程。
【关键词】：EMT IL-6 二甲双胍 胃癌细胞SGC-7901 E-Cadherin Vimentin
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要4-7
• abstract7-12
• 主要英文缩略词索引12-13
• 前言13-15
• 1 材料与方法15-21
• 2 实验方法21-31
• 3 实验结果31-37
• 讨论37-40
• 结论40-41
• 参考文献41-45
• 综述部分 EMT与恶性肿瘤之间关系的研究进展45-64
• 参考文献55-64
• 个人简历及在读期间发表的论文64-65
• 致谢65

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本文编号：506668