人类肝细胞性肝癌细胞系Hep G2和Li-7在裸鼠体内成瘤研究及其血清蛋白谱分析

发布时间：2017-07-02 13:02

  本文关键词：人类肝细胞性肝癌细胞系Hep G2和Li-7在裸鼠体内成瘤研究及其血清蛋白谱分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:将人类肝细胞性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)细胞系Hep G2和Li-7的细胞悬液,分别接种在BALB/c A-nu裸鼠(雌性,4周龄)的左上肢背侧皮下,以研究其在裸鼠体内的致瘤作用。采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,SELDI-TOF-MS),在不同的时间点分析裸鼠体内微量蛋白质的变化,以筛选与肝癌相关的微量蛋白标志物。方法:购买商品化的Hep G2和Li-7细胞系,在大量传代培养之后,选择处于对数生长期的细胞,采用RPMI-1640细胞培养基将其配制成一定浓度的细胞悬液,并以一定的剂量接种在裸鼠的左上肢背侧皮下。对照组在相同的部位接种同等剂量的RPMI-1640细胞培养基。观察裸鼠的生长情况,每周定时称量裸鼠体重。裸鼠取血采用摘眼球取血法。对于注射Hep G2细胞的裸鼠,分别在注射后的第20天,第40天和第60天的三个时间点取血,每个时间点均包括一组对照组和一组实验组裸鼠。对于注射Li-7细胞的裸鼠,在注射后的第40天取血。待所取得的血液凝固后,在常温下离心6分钟,转速为6000 rpm(Revolutions Per Minute,转/分钟)。将获得的血清分装在新的ep管中,并立即冻存在超低温(-80℃)冰箱。待裸鼠死亡之后,取出重要脏器肝,肺,肾,胃做病理检查。采用SELDI-TOF-MS分析血清中的蛋白谱变化,利用质谱仪系统自带分析软件(Ciphergen Protein Chip 3.0和Ciphergen Biomaker Wizard 3.1)和统计学分析软件SPSS 16.0对所取得的数据进行分析,从而筛选出具有差异性的蛋白。结果:(1)两种人类HCC细胞系在裸鼠体内均未形成瘤块。注射Hep G2细胞的裸鼠解剖未发现脏器异常,注射Li-7细胞的裸鼠,其肝脏出现水肿,胃出现灶性粘膜肠化的现象;(2)注射Hep G2细胞的裸鼠,对照组裸鼠在生长过程中的不同时间点间出现了9个差异微量蛋白,其中上调的有3个,质荷比(Mass-to-Charge Ratio,M/Z)分别为4014.16、4122.70和8373.05,下调的有3个,M/Z分别为1264.62、1491.80和22582.5。实验组裸鼠在生长过程中的不同时间点间出现了29个差异蛋白,其中上调的有5个,M/Z分别为3701.15、4560.87、8169.14、8258.08和12047.4,下调的有3个,M/Z分别为1025.35、1045.15和4319.54,这些具有规律性变化的微量蛋白质在对照裸鼠体内均未发现。对照组和实验组裸鼠在生长过程中同时出现的差异蛋白有4个,M/Z分别1264.62、1491.80、4014.16和8373.05,其中,4014.16和8373.05在对照组中上调,1264.62和1491.80在对照组中下调,而这4个蛋白在实验组中没有规律性变化。(3)注射Li-7细胞的裸鼠,对照组和实验组出现了12个差异性微量蛋白,M/Z分别为1027.39、1087.44、1179.59、1192.62、1483.17、1563.20、3763.00、3869.26、4319.54、6646.16、8793.72和9259.75。结论:1.人类HCC细胞系Hep G2和Li-7在裸鼠体内不致瘤。并不是每一种肝癌细胞系在裸鼠体内都可以复制出模型。2.采用SELDI-TOF-MS分析血清的蛋白变化,筛选具有差异的蛋白,可以为肝癌的诊断和研究提供新思路。3.不同肝癌细胞系在裸鼠体内所产生的的微量蛋白种类和数量不同,提示不同细胞系的肝癌应具有不同的微量蛋白标志物。
【关键词】：SELDI-TOF-MS HCC 蛋白质组学 Hep G2 Li-7
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-19
• 第一部分 人类 HCC 细胞系 Hep G2 和 Li-7 在裸鼠中的成瘤研究19-28
• 材料与方法19-28
• 1 实验材料19-20
• 2 主要实验试剂20
• 3 主要实验仪器20-21
• 4 实验方法21-28
• 第二部分 裸鼠血清蛋白谱分析28-31
• 1 实验材料28
• 2 主要实验试剂28
• 3 主要实验仪器28-29
• 4 实验方法29-31
• 结果31-41
• 讨论41-48
• 结论48-49
• 参考文献49-53
• 英汉缩略词对照表53-55
• 致谢55-56
• 胆管细胞性肝癌的诊断和预后血清标志物（综述）56-86
• References73-86

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 郝华;欧海玲;崔锦珠;;蛋白质组学技术在肝癌研究中的应用进展[J];临床和实验医学杂志;2009年05期

  本文关键词：人类肝细胞性肝癌细胞系Hep G2和Li-7在裸鼠体内成瘤研究及其血清蛋白谱分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：509972