高三尖杉酯碱联合阿霉素对白血病细胞作用的探讨

发布时间：2017-07-03 03:08

  本文关键词：高三尖杉酯碱联合阿霉素对白血病细胞作用的探讨

  更多相关文章： 高三尖杉酯碱 阿霉素 急性髓系细胞白血病 凋亡 K562细胞 HUVEC细胞

【摘要】：目的:探讨高三尖杉酯碱与蒽环类药物阿霉素联用时对白血病细胞的增殖,凋亡的影响及作用机制。方法:1.根据单独给药和联合给药方式,将高三尖杉酯碱,阿霉素处理K562细胞及HUVEC细胞后,MTT实验分析出各组药物不同作用时间后的细胞抑制率和IC50浓度,并做统计学分析。2.Annexin V-PE/7-AAD双染法流式细胞术实验检测高三尖杉酯碱单药,阿霉素单药以及高三尖杉酯碱联合阿霉素作用于K562细胞,HUVEC细胞后细胞凋亡情况。3.使用Western blot法检测高三尖杉酯碱,阿霉素及高三尖杉酯碱联合阿霉素联合对K562细胞中PARP,RIP1及Caspase3表达的影响。结果:1.MTT实验结果显示高三尖杉酯碱,阿霉素以及高三尖杉酯碱+阿霉素对K562和HUVEC细胞的增殖均有抑制作用(P0.05,n=6),且有浓度依赖性。当联合用药时,相对于HUVEC细胞,对K562细胞的增殖抑制作用更强(P0.05,n=6)。2、高三尖杉酯碱及阿霉素均可诱导K562细胞凋亡,有浓度依赖性(P0.05,n=6);高三尖杉酯碱联合阿霉素作用于K562细胞,其凋亡率随着药物浓度的增加和时间的延长有显著提升,表现出浓度及时间依赖性,差异有统计学意义(P0.05,n=6)。3、Western blot实验结果显示,高三尖杉酯碱处理K562细胞24小时后各浓度组cleaved-PARP蛋白的表达量较对照组有明显的上调趋势;在100倍高三尖杉酯碱处理组中active-Caspase3蛋白明显出现表达;阿霉素处理K562细胞24小时后,各浓度药物处理组中cleaved-PARP蛋白的表达量均呈上调趋势,active-Caspase3和RIP1均表达阴性。高三尖杉酯碱联合阿霉素作用于K562细胞24小时后,IC50浓度阿霉素组中active-Caspase-3和RIP1表达明显上调,其他各单药组和联合用药组中RIP1均为表达阳性,active-Caspase-3蛋白表达量明显较100×HHT组高。结论:1.高三尖杉酯碱、阿霉素以及高三尖杉酯碱联合阿霉素均可抑制K562细胞和HUVEC细胞增殖。高三尖杉酯碱联合阿霉素用药时对K562细胞的抑制作用较对HUVEC细胞强。2.高三尖杉酯碱及阿霉素均可诱导K562细胞凋亡,高三尖杉酯碱联合阿霉素时对K562细胞的凋亡增强并可诱导坏死性凋亡。3.高三尖杉酯碱及阿霉素均可通过诱导PARP降解促进K562细胞凋亡,且呈浓度依赖性;高浓度HHT可使active-Caspase-3表达,同时IC50浓度HHT联合阿霉素可使active-Caspase-3增高及使RIPI表达呈阳性,提示该浓度组合可促进K562细胞发生凋亡及坏死性凋亡。
【关键词】：高三尖杉酯碱 阿霉素 急性髓系细胞白血病 凋亡 K562细胞 HUVEC细胞
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 缩略词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料与方法12-23
• 2.1 主要试剂和材料12
• 2.2 主要设备12-13
• 2.3 试剂的配置13
• 2.4 细胞学实验13-16
• 2.4.1 细胞复苏13-14
• 2.4.2 细胞换液14
• 2.4.3 细胞传代14-15
• 2.4.4 细胞冻存15-16
• 2.4.5 细胞计数16
• 2.5 MTT比色试验（四唑盐比色试验）16-19
• 2.5.1 单药作用于细胞及IC50浓度的测定16-18
• 2.5.2 高三尖杉酯碱联合阿霉素用药测定细胞的抑制率18-19
• 2.6 流式细胞术检测细胞凋亡率19-21
• 2.6.1 实验原理19
• 2.6.2 实验药物的分组19-20
• 2.6.3 实验步骤20-21
• 2.6.4 流式细胞仪检测细胞凋亡21
• 2.7 Western blot检测高三尖杉酯碱、阿霉素和高三尖杉酯碱联合阿霉素作用白血病细胞和正常细胞后相关蛋白的表达水平差异21-22
• 2.8 统计学方法22-23
• 第3章 结果23-30
• 3.1 高三尖杉酯碱、阿霉素，以及高三尖杉酯碱+阿霉素联合作用对K562细胞和HUVEC细胞增殖的影响23-25
• 3.1.1 高三尖杉酯碱对K562细胞和HUVEC细胞增殖的影响23
• 3.1.2 阿霉素对K562细胞和HUVEC细胞增殖的影响23-24
• 3.1.3 高三尖杉酯碱联合阿霉素对K562细胞和HUVEC细胞增殖的影响24-25
• 3.2 Annexin V-PE/7-AAD双染法检测高三尖杉酯碱、阿霉素以及高三尖杉酯碱+阿霉素联合作用对K562细胞和凋亡的影响25-28
• 3.2.1 Annexin V-PE/7-AAD双染法检测HHT作用K562细胞凋亡率25-26
• 3.2.2 Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞术检测阿霉素作用K562细胞凋亡率26-27
• 3.2.3 Annexin V-PE/7-AAD双染法检测HHT联合ADM作用K562细胞凋亡率27-28
• 3.3 Western blot检测高三尖杉酯碱、阿霉素以及高三尖杉酯碱+阿霉素作用白血病细胞后凋亡/坏死相关蛋白的表达水平差异28-30
• 第4章 讨论30-34
• 4.1 高三尖杉酯碱，阿霉素及高三尖杉酯碱联合阿霉素对细胞增殖的影响30-31
• 4.1.1 对慢性粒细胞白血病急变株K562细胞的影响30-31
• 4.1.2 对人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）的影响31
• 4.2 高三尖杉酯碱，，阿霉素及高三尖杉酯碱联合阿霉素对细胞凋亡的影响31-32
• 4.3 高三尖杉酯碱对K562细胞凋亡相关蛋白表达的影响32-34
• 第5章 结论34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-38
• 综述 高三尖杉酯碱的作用机理及临床应用38-44
• 参考文献42-44

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 马明信;高三尖杉酯碱为主方案治疗急性非淋巴细胞白血病40例报告[J];浙江中西医结合杂志;1994年02期

2 安振梅,魏松全,许淑惠,赵桂芝;高三尖杉酯碱对人眼球后成纤维细胞增殖的影响[J];华西医科大学学报;2000年01期

3 王莉红,陈德福;高三尖杉酯碱在慢性髓细胞白血病治疗中的应用[J];国外医学.输血及血液学分册;2001年05期

4 王莉红,钱林生,李睿,李大鹏,徐泽锋,王国蓉,邱录贵;干扰素α联合高三尖杉酯碱维持治疗慢性粒细胞白血病15例疗效观察[J];中国实用内科杂志;2002年11期

5 慢性粒细胞白血病治疗协作组;罗荛愫联合高三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病的临床研究[J];中华血液学杂志;2003年01期

6 骆锦忠 ,樊亚群;小剂量高三尖杉酯碱治疗16例真性红细胞增多症疗效观察[J];福建医药杂志;2003年03期

7 李玉峰,王春玲,丁帮和,朱家斌,郑绍同,于亮,钱墨生;高三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病的远期疗效观察[J];中华血液学杂志;2004年06期

8 冯长伟;郭群依;张丽;罗文达;;高三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病继发血小板增多症[J];浙江临床医学;2007年02期

9 汪蕾;胡钧培;朱琦;邹丽芳;;高三尖杉酯碱对老年骨髓增生异常综合征患者的疗效观察[J];中国医药指南;2008年03期

10 白厚桥;高鹏;;23例慢性粒细胞白血病用高三尖杉酯碱治疗的临床分析[J];中国实用医药;2009年24期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 黄昕;王云贵;金洁;;高三尖杉酯碱通过非抑制络氨酸激酶的途径诱导慢性粒细胞白血病细胞的凋亡[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

2 汤燕静;顾龙君;薛惠良;陈静;沈树红;刘茵;叶启东;董璐;周敏;江华;罗长缨;;含高三尖杉酯碱治疗方案对229例儿童急性髓细胞白血病的远期疗效探讨[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

3 孙敬田;丁玉峰;张文东;;HPLC法测定高三尖杉酯碱氯化钠注射液的含量[A];山东省药学会第一届学术年会论文集（上）[C];2005年

4 蔡真;胡洁;;高三尖杉酯碱通过内质网应激诱导MUTZ-1细胞凋亡[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年

5 包悍英;蔡真;;Survivin mRNA表达水平与高三尖杉酯碱诱导恶性血液病细胞凋亡的相关性研究[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

6 周峰;许小平;陈波斌;陈字;解丽华;姬美容;林果为;;耐高三尖杉酯碱MDS细胞系的建立及其生物学特性研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

7 胡洁;蔡真;;高三尖杉酯碱通过内质网应激诱导MUTZ-1细胞凋亡[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

8 赵初娴;刘文文;王椿;颜式可;高彦荣;蔡琦;魏道林;;高三尖杉酯碱对Ph+树突状细胞成熟与功能的影响[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年

9 胡洁;何冬花;高良;杨春虎;蔡真;;内质网相关的凋亡途径在高三尖杉酯碱诱导MUTZ-1细胞凋亡过程中的作用[A];2006年浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2006年

10 赵e

本文编号：512154