雷公藤内酯醇和美托洛尔对小鼠黑色素瘤B16细胞株的影响

发布时间：2017-07-05 01:10

  本文关键词：雷公藤内酯醇和美托洛尔对小鼠黑色素瘤B16细胞株的影响

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【摘要】：目的:黑色素瘤恶性程度高,易发生转移且手术切除后复发率高。目前,其发病率在世界范围内不断地增加。现在的医疗手段对其并没有理想的治疗方法。为寻找治疗恶性黑色素瘤的有效药物,本文探讨雷公藤内酯醇和美托洛尔对小鼠黑色素瘤B16细胞株的影响及部分作用机制,为临床治疗提供基础实验依据。方法:1 细胞培养2 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制B16细胞的生长曲线,了解B16细胞生长特征,为后续试验做准备。3 采用MTT法检测两种药物在不同时间和不同浓度下对B16细胞的影响。4 应用倒置显微镜和HE染色法观察B16细胞在药物干预前后相关因素的变化。5 应用流式细胞技术(FCM)检测B16细胞周期和凋亡情况。6 采用免疫细胞技术检测血管内皮生长因子表达情况。7 应用统计软件SPSS16.0进行统计学分析。结果:1 MTT法绘制B16细胞生长曲线细胞在96孔板中培养不同时间后,用酶标仪测OD值,绘制成的生长曲线近似“S”型。2 MTT检测结果随着雷公藤内酯醇浓度的增高、药物作用时间的延长,其对细胞的抑制作用越大(P0.05)。随着美托洛尔浓度的增高、药物作用时间延长,其对细胞的抑制作用越大(P0.05)。雷公藤内酯醇组与美托洛尔组比较,两种药物干预细胞24小时后,2.5ng/ml浓度的雷公藤内酯醇组的抑制率与15.63ug/ml浓度的美托洛尔组的抑制率无显著差异(P0.05);5.0ng/ml浓度的雷公藤内酯醇组的抑制率与31.25ug/ml浓度的美托洛尔组的抑制率无显著差异(P0.05),其余不同浓度组间相比有显著差异(P0.05)。两种药物干预细胞48小时后,2.5ng/ml浓度的雷公藤内酯醇组的抑制率与15.63ug/ml浓度的美托洛尔组的抑制率无显著差异(P0.05);5.0ng/ml浓度的雷公藤内酯醇组的抑制率与31.25ug/ml浓度的美托洛尔组的抑制率无显著差异(P0.05),其余不同浓度组间相比有显著差异(P0.05)。两种药物干预细胞72小时后,两药物不同浓度组间相比较均有显著差异(P0.05),且25ng/ml浓度的雷公藤内酯醇组对B16细胞抑制作用最大。3 倒置显微镜下细胞形态特征及培养基颜色观察药物干预前,B16细胞生长良好,呈多角形或菱形,贴壁生长,单层均匀分布,细胞间可见细丝连接,细胞膜完整,可见细胞核,折光性好,培养基澄清透明。药物干预后,细胞贴壁能力下降,部分细胞呈漂浮生长状态,细胞变小、变圆、皱缩,细胞间连接消失,核折光性下降,随着药物浓度的增高及药物作用时间的延长,细胞的形态变化越大,且雷公藤内酯醇组对细胞形态影响强于美托洛尔组。雷公藤内酯醇组培养基的颜色随着药物浓度的变大、作用时间的延长,各浓度组间呈现由暗黄色到粉红色的梯度颜色变化。美托洛尔各浓度组间培养基颜色无明显变化。4 HE染色观察B16细胞形态学特征药物干预前,镜下可见细胞质呈粉红色,细胞核呈蓝色,可见核分裂,多个细胞核,细胞膜完整,细胞贴壁数目较多,细胞间连接紧密,细胞分布均匀。药物干预后,贴壁细胞数目少,细胞间连接消失,可见孤立、成团的细胞,细胞膜部分破裂,可见细胞核萎缩、碎裂。比倒置显微镜下观察细胞形态更清晰。相对于美托洛尔组而言,雷公藤内酯醇对细胞形态影响更大。5药物对B16细胞的细胞周期及凋亡的影响两药物组分别与对照组比较,G0/G1期随着药物浓度增高,处于该周期的细胞比例增加(P0.05),S期随着药物浓度的增高,处于该期的细胞比例减少(P0.05)。两种药物干预细胞48小时后,在B16细胞DNA直方图上没有发现明显的亚G1峰(细胞凋亡峰)。6药物对B16细胞VEGF蛋白表达影响两种药物组分别与对照组比较,VEGF蛋白量表达均下降(P0.05),且雷公藤内酯醇组随着药物浓度的增加VEGF表达量下降(P0.05),美托洛尔组随着药物浓度的增加VEGF表达量无明显下降(P0.05)。雷公藤内酯醇组与美托洛尔组比较,雷公藤内酯醇使VEGF蛋白表达量的下降更显著。结论:1 雷公藤内酯醇和美托洛尔均可抑制小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖,且在一定范围内具有浓度依赖性和时间依赖性。2 雷公藤内酯醇和美托洛尔可将细胞周期抑制在G0/G1期,且在一定范围内有浓度依赖性。本实验未检测到两种药物引起的凋亡现象,可能是被干预的细胞正处于凋亡的早期阶段等原因,故不能排除两种药物通过凋亡机制抑制B16细胞的可能性,需进一步探讨。3 雷公藤内酯醇和美托洛尔均能使B16细胞中VEGF表达量下降,且雷公藤内酯醇的抑制作用强于美托洛尔并具有浓度依赖性。故可以推断抑制VEGF表达可能是两种药物抗肿瘤的作用机制之一。4 雷公藤内酯醇对B16细胞的抑制增殖作用强于美托洛尔。
【关键词】：黑色素瘤 雷公藤内酯醇 美托洛尔 B16细胞 周期
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-22
• 结果22-25
• 附图25-35
• 附表35-38
• 讨论38-42
• 结论42-43
• 参考文献43-46
• 综述 晚期恶性黑色素瘤的治疗进展46-57
• 参考文献53-57
• 致谢57-58
• 个人简历58

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1 杨春欣,周庭川,秦万章;雷公藤内酯醇不同季节的含量变化[J];中国医院药学杂志;2001年01期

2 胡可斌,刘志红,刘栋,黎磊石;雷公藤内酯醇抑制血管内皮细胞生长因子的表达与合成[J];中华医学杂志;2001年18期

3 王曙东,滕英博,谢虞;不同吸附条件对雷公藤内酯醇含量的影响[J];南京中医药大学学报;2005年05期

4 王瑜;张U，

本文编号：519986