量子点免疫层析试纸和磁分选细胞在肺癌诊断上的研究

发布时间：2017-07-05 09:20

  本文关键词：量子点免疫层析试纸和磁分选细胞在肺癌诊断上的研究

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【摘要】：纳米科技作为一种新兴科技,自产生开始就得到了快速的发展和广泛的关注。其中,量子点因其量子限域效应、尺寸效应等四大效应,磁珠因其比表面积大、超顺磁性等优点,都受到了研究工作者的重视,在细胞的分离富集,蛋白质的标记和检测,靶向给药和治疗等方面中发挥着日益重要的作用。肺癌是我国第一大肿瘤,对于人们的生命健康正产生着巨大的威胁,绝大部分肺癌患者在确诊时已处于肺癌晚期,极大的增大了治愈肺癌的难度,减少了病人的存活时间。因此,临床上肺癌的早期诊断对提高肺癌治愈的可能性和增加肺癌患者的存活时间具有至关重要的作用,这对早期肺癌的诊断方法带来很大的挑战,同时也促进了肺癌肿瘤标记物研究的快速发展。肿瘤标志物是存在于癌症病人体内的某些特定的蛋白,其含量的变化对于病人的早期诊断、病情监测、治疗效果及预后的评价具有非常重要的意义。目前在临床上,肿瘤标志物已经成为评价肿瘤患者病况的一项重要检测指标。循环肿瘤细胞是由原发灶肿瘤上的肿瘤细胞脱落入侵进入血管中形成的,在血液的运输下,进入身体的其他部位,是肿瘤扩散的根本原因。循环肿瘤细胞的数量与癌症患者体内肿瘤所处的阶段密切相关,对于肿瘤的早期诊断,癌症的病况监测和治疗方案的选择有着极为重要的临床价值。本论文分别从分子水平对肿瘤标志物进行检测和细胞水平对循环肿瘤细胞进行检测,探索肺癌早期诊断新途径。1.本文对肺癌的检测利用了量子点在紫外光激发下具有明亮荧光的特点,制备了量子点免疫层析检测卡,成功实现了对神经元特异性烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)的检测,且该检测卡具有良好的特异性,检测限可低至2ng/m L,检测灵敏度优于胶体金对NSE的检测限,可方便、快速、灵敏、批量的检测,具有良好的应用价值。2.针对血液中的循环肿瘤细胞数量极少,很难被监测到等特点,通过免疫磁珠对循环肿瘤细胞进行分离富集,并进行荧光标记技术对捕获的循环肿瘤细胞荧光标记,成功的从大量干扰细胞中把少量的循环肿瘤细胞进行分离富集,并通过电化学阻抗技术和荧光强度对捕获的细胞数量进行定性定量检测。该方法具有灵敏度高、特异性好等特点,在肺癌的临床诊断方面具有潜在的应用价值。
【关键词】：量子点 肺癌 临床诊断 磁珠 循环肿瘤细胞 灵敏度 特异性
【学位授予单位】：上海师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2;TB383.1
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第1章 绪论10-25
• 1.1 研究意义10-12
• 1.2 研究进展12-16
• 1.2.1 体外诊断试剂12-13
• 1.2.2 肺癌的常见诊断方法13-14
• 1.2.3 量子点的性质、制备以及应用14-15
• 1.2.4 磁珠的性质、制备以及应用15-16
• 1.3 量子点免疫层析方法16-20
• 1.3.1 免疫量子点的制备16-18
• 1.3.2 硝酸纤维素膜的选择18
• 1.3.3 竞争法和双抗夹心法18-20
• 1.3.4 量子点免疫层析方法的发展趋势20
• 1.4 富集循环肿瘤细胞的分离富集和检测20-23
• 1.4.1 磁珠的制备、修饰和免疫化20-21
• 1.4.2 免疫磁珠分离富集循环肿瘤细胞21-22
• 1.4.3 循环肿瘤细胞的多种检测方法22-23
• 1.4.4 磁分选技术分离富集CTC的发展趋势23
• 1.5 本论文研究的目的和内容23-25
• 第2章 量子点免疫层析试纸检测肺癌肿瘤标志物NSE25-39
• 2.1 引言25-26
• 2.2 实验部分26-30
• 2.2.1 试剂与仪器26
• 2.2.2 QDs-COOH探针荧光强度，Zeta电位和粒径的测定26
• 2.2.3 QDs-COOH探针偶联抗体条件的优化26-27
• 2.2.4 量子点免疫层析试纸的结构27
• 2.2.5 量子点免疫层析试纸的制备27-28
• 2.2.6 免疫层析试纸检测NSE抗原的原理及结果判定28-29
• 2.2.7 对NSE抗原的标准溶液的检测及检测限的确定29
• 2.2.8 免疫层析试纸的特异性实验29
• 2.2.9 免疫层析试纸的稳定性实验29
• 2.2.10 免疫层析试纸联合检测NSE和CEA抗原29-30
• 2.3 结果与讨论30-38
• 2.3.1 QDs-COOH偶联抗体条件的优化30-33
• 2.3.2 量子点偶联抗体前后的水合粒径33
• 2.3.3 对NSE抗原的标准溶液的定性检测及检测限的确定33-34
• 2.3.4 免疫层析试纸的特异性实验34-35
• 2.3.5 免疫层析试纸的稳定性实验35-37
• 2.3.6 免疫层析试纸联合检测NSE和CEA抗原37-38
• 2.4 本章小结38-39
• 第3章 磁性Fe_3O_4纳米粒子的制备及表面修饰39-52
• 3.1 引言39
• 3.2 实验部分39-42
• 3.2.1 实验试剂与仪器39-40
• 3.2.2 磁性Fe_3O_4纳米粒子的制备40
• 3.2.3 柠檬酸钠分散磁性纳米粒子和盐酸纯化40
• 3.2.4 二氧化硅包覆磁性纳米粒子40
• 3.2.5 磁珠表面氨基的修饰40-41
• 3.2.6 抗体偶联磁珠条件的优化41-42
• 3.3 实验结果与分析42-51
• 3.3.1 裸磁珠的表征42-43
• 3.3.2 包覆柠檬酸钠的磁性Fe_3O_4纳米粒子的表征43-44
• 3.3.3 包覆Si O_2的磁性Fe_3O_4纳米粒子的表征44-46
• 3.3.4 磁性Fe_3O_4纳米粒子表面修饰氨基46-47
• 3.3.5 磁珠固含量的测定47-48
• 3.3.6 抗体偶联条件的优化48-51
• 3.4 本章小结51-52
• 第4章 循环肿瘤细胞的磁分离富集和检测52-66
• 4.1 引言52
• 4.2 实验部分52-56
• 4.2.1 实验试剂与仪器52
• 4.2.2 细胞的处理52-54
• 4.2.3 免疫磁珠捕获细胞54
• 4.2.4 免疫磁珠偶联抗体种类的优化54
• 4.2.5 免疫磁珠加入量的优化54-55
• 4.2.6 磁珠捕获细胞的特异性实验55
• 4.2.7 磁珠捕获细胞的灵敏度实验55
• 4.2.8 被捕获细胞的电化学阻抗检测55-56
• 4.2.9 被捕获细胞的荧光发光强度检测56
• 4.3 结果与讨论56-64
• 4.3.1 偶联不同种类抗体的免疫磁珠对CTC的捕获56-57
• 4.3.2 不同量的磁珠对CTC的捕获57-59
• 4.3.3 免疫磁珠对CTC捕获的特异性实验59-61
• 4.3.4 免疫磁珠捕获CTC的灵敏度实验61-62
• 4.3.5 CTC捕获的电化学阻抗定性检测62-63
• 4.3.6 CTC捕获的荧光强度定量检测63-64
• 4.4 本章小结64-66
• 参考文献66-70
• 硕士期间获得的研究成果70-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：521387