二氯乙酸联合顺铂诱导人结肠癌细胞HCT116凋亡及其机制研究

发布时间：2017-07-05 18:26

  本文关键词：二氯乙酸联合顺铂诱导人结肠癌细胞HCT116凋亡及其机制研究

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【摘要】：目的:探讨二氯乙酸(dichloroacetate,DCA)联合顺铂对人结肠癌细胞HCT116凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:DCA单独及联合应用顺铂处理HCT116细胞后以MTT法检测药物对细胞的增殖抑制率,Hoechst33342染色观察凋亡细胞形态;用阳离子亲脂性荧光染料Rhomine123染色细胞,荧光显微镜下观察线粒体跨膜电位变化(Δψm);用分光光度法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的活性;Real-Time PCR检测基因bcl-2的表达情况;运用Western Blot检测Bcl-2、Cytochrome c和Caspase-3蛋白的表达情况。结果:DCA、顺铂单独使用对HCT116细胞增殖均有抑制作用且呈时间—剂量依赖性。与同浓度单药相比,10mmol/L DCA联合20μg/ml顺铂(CDI=0.434±0.021)处理细胞48hrs后呈现出明显的协同效应。单独使用DCA或顺铂均能在荧光显微镜下观察到细胞核浓聚或碎裂、线粒体跨膜电位降低,但两药联合效果明显强于单药。检测Caspase-3活性发现,联合用药组明显高于单药组(P0.01);定量PCR(Real-Time PCR)结果显示,药物处理12hrs后,联合用药组bcl-2表达明显下调,与单独用药组比较差异均有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,单独及联合用药组cleaved-caspase-3和Cytochrome c表达明显上调,Bcl-2的表达明显下调,单药组上调或下调程度明显低于联合用药组。结论:本研究发现DCA及顺铂对人结肠癌HCT116细胞均有增殖抑制和促凋亡的作用,随着药物浓度增加、作用时间的延长其作用也增加。DCA和顺铂联合作用对人结肠癌HCT116细胞增殖抑制和促凋亡作用具有协同性,其机制可能是通过多个作用机制包括导致线粒体跨膜电位降低、Bcl-2的表达下调、Caspase-3激活及与Cytochrome c释放增加有关。
【关键词】：二氯乙酸 顺铂 协同效应 凋亡 结肠癌
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 缩略语表10-11
• 前言11-22
• 第一部分 DCA联合顺铂对结肠癌细胞增殖及凋亡影响22-35
• 材料与方法22-29
• 结果29-32
• 讨论32-35
• 第二部分 DCA联合顺铂致结肠癌细胞凋亡的机制研究35-58
• 第一节 结肠癌细胞线粒体膜电位变化及Caspase-3 蛋白活化35-43
• 材料与方法35-39
• 结果39-40
• 讨论40-43
• 第二节 DCA联合顺铂致结肠癌细胞凋亡的机制研究43-58
• 材料与方法43-53
• 结果53-56
• 讨论56-58
• 全文小结58-61
• 参考文献61-69
• 致谢69-70
• 攻读硕士学位期间发表的论文70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;T-2 toxin-induced apoptosis involving Fas,p53,Bcl-xL,Bcl-2,Bax and caspase-3 signaling pathways in human chondrocytes[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2008年06期

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本文编号：523087