URI促进胃癌细胞阿霉素耐药性和细胞迁移

发布时间：2017-07-06 13:00

  本文关键词：URI促进胃癌细胞阿霉素耐药性和细胞迁移

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【摘要】：研究背景:胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,在导致死亡的肿瘤中排第二。超过70%的诊断和死亡发生于发展中国家,尤其以中国的发病率最高。早期胃癌的治疗常采取外科手术切除,但是大部分胃癌被确诊时已经是晚期,并且发生了转移,错过了手术治疗的最佳时间。晚期患者预后不良,五年生存率不到15%。为了改善其生命质量和延长生命,联合化疗是最主要的方法。由于药物抵抗及复发转移,胃癌病人的预后不容乐观。因此,需要寻找有效可行的方法来解决胃癌对化疗药物抵抗和复发转移等问题。非常规前折叠素RPB5作用因子URI,是RNA聚合酶II亚型5的作用蛋白,参与营养敏感m TOR依赖的转录程序的调控,多项研究已经表明URI是一个癌蛋白。然而,URI是否在胃癌肿瘤形成中起作用目前还未阐明。在胃癌细胞中,PI3K/Akt/m TOR通路过表达,对胃癌的预后具有潜在意义。本文我们探索URI对胃癌细胞MGC-803和HGC-27的作用,主要针对阿霉素抵抗和细胞迁移及其机制的研究。研究目的:本文研究URI对MGC-803和HGC-27细胞生物学特征的作用,主要探索URI对胃癌细胞阿霉素耐药性和迁移能力的影响。研究方法:(1)细胞培养胃癌细胞MGC-803培养于DMEM培养基内,HGC-27细胞采用RPMI-1640培养基培养,培养基中均含10%胎牛血清及1%青霉素和链霉素的混合物,细胞于37℃5%CO2培养箱中对数生长。(2)过表达或敲低URI免疫印迹法检测SGC-7901、HGC-27、MGC-803和BGC-823细胞URI的表达,选择MGC-803和HGC-27细胞进行下一步实验。过表达胃癌细胞URI采用脂质体2000瞬时转染URI表达质粒p CMV6-URI,敲低细胞URI通过瞬转URI干扰片段si RNA-A、si RNA-B和si RNA-C实现。荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法用于检测URI在m RNA和蛋白水平的表达。(3)细胞增殖实验CCK-8法检测URI过表达和敲低后,在有无阿霉素作用下的细胞增殖。(4)凋亡相关蛋白的表达及凋亡分析蛋白免疫印迹法检测过表达和敲低URI凋亡相关蛋白的水平,流式细胞技术检测阿霉素处理下敲低URI细胞的凋亡。(5)细胞迁移实验Transwell小室实验了解转染细胞的迁移能力,免疫印迹法检测EMT相关蛋白Vimentin和Snail的表达。研究结果:(1)URI在胃癌细胞中的表达免疫印迹法显示四株胃癌细胞均有URI表达,我们选择低分化的MGC-803细胞和未分化的HGC-27细胞进行接下来的实验。转染p CMV6-URI质粒细胞的URI表达明显升高,转染URI si RNA干扰片段细胞URI的水平显著降低,其中URI si RNA-A的敲低效果最强。(2)URI促进胃癌细胞增殖转染p CMV6-URI过表达URI促进两株细胞的增殖,敲低URI显著减弱细胞增殖。(3)URI拮抗阿霉素对细胞增生的抑制,减弱其诱导的凋亡CCK-8试剂盒用于检测细胞的增殖。转染p CMV6-URI细胞阿霉素的IC50值明显增高,敲低URI其值降低。阿霉素处理后,过表达URI细胞的Bax/Bcl-2相对比值、裂解的PARP-1和Caspase-3水平均降低。相反,敲低URI增加两株细胞Bax/Bcl-2相对比值、裂解的PARP-1和Caspase-3的水平。与对照组相比,阿霉素处理敲低URI的细胞,早期凋亡(Annexin V+/PI-)在两株细胞中均显著增加。(4)URI促进细胞迁移能力及增加Vimentin和Snail的表达在两株胃癌细胞中,转染p CMV6-URI增强细胞的迁移能力,引起EMT标志物Vimentin和Snail的表达增加。转染URI si RNA减弱细胞迁移,Vimentin和Snail的表达均显著减低。结论:(1)URI能促进胃癌细胞的增殖能力。(2)URI通过促进细胞增殖增强药物抵抗,通过Caspase依赖的方式抑制细胞凋亡。(3)URI可能通过上调EMT相关蛋白Vimentin和Snail的表达促进细胞迁移。
【关键词】：URI 胃癌细胞 药物抵抗 阿霉素 细胞迁移
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要5-9
• ABSTRACT9-14
• 英文缩略词表14-18
• 第一章 绪论18-25
• 1.1 URI基因18-19
• 1.2 URI与多种恶性肿瘤之间的关系19-22
• 1.2.1 URI与肝癌19-20
• 1.2.2 URI与卵巢癌20-21
• 1.2.3 URI与多发性骨髓瘤21
• 1.2.4 URI与宫颈癌21-22
• 1.3 胃癌复发转移与预后22-24
• 1.4 结语24-25
• 第二章 URI干预胃癌细胞的构建25-43
• 2.1 实验材料和仪器25-29
• 2.1.1 实验试剂25-26
• 2.1.2 实验耗材26-27
• 2.1.3 实验仪器27-28
• 2.1.4 相关试剂的配制28-29
• 2.2 方法29-38
• 2.2.1 细胞复苏29-30
• 2.2.2 细胞传代30
• 2.2.3 细胞转染30-32
• 2.2.4 荧光定量PCR分析32-35
• 2.2.5 蛋白印记法检测相关蛋白的表达35-38
• 2.2.6 统计学分析38
• 2.3 结果38-42
• 2.3.1 Western blotting分析四株胃癌细胞URI的表达38
• 2.3.2 q RT-PCR检测干预胃癌细胞URI在m RNA水平的表达38-40
• 2.3.3 Western Blotting检测干预胃癌细胞URI的蛋白水平40-42
• 2.4 讨论42-43
• 第三章 过表达或敲低URI影响胃癌细胞增殖以及对阿霉素的抵抗43-51
• 3.1 实验材料和相关仪器43-44
• 3.1.1 实验试剂43
• 3.1.2 实验耗材和仪器43
• 3.1.3 阿霉素储存浓度的制备43-44
• 3.2 方法44-45
• 3.2.1 CCK-8 试剂盒检测细胞活力44
• 3.2.2 检测干预后MGC-803 和HGC-27 细胞对阿霉素的抵抗44-45
• 3.2.3 统计学分析45
• 3.3 实验结果45-49
• 3.3.1 过表达和敲低URI对MGC-803 和HGC-27 细胞增殖的影响45-46
• 3.3.2 干预URI影响胃癌细胞对阿霉素的耐药性46-49
• 3.4 讨论49-51
• 第四章 阿霉素处理下URI对胃癌细胞凋亡的作用及机制51-57
• 4.1 实验材料和仪器51-52
• 4.1.1 实验试剂51
• 4.1.2 主要耗材51
• 4.1.3 实验仪器51-52
• 4.2 实验方法52
• 4.2.1 免疫印迹法52
• 4.2.2 流式细胞仪检测细胞凋亡52
• 4.2.3 统计学分析52
• 4.3 实验结果52-55
• 4.3.1 URI调控阿霉素作用后细胞凋亡相关蛋白的表达52-54
• 4.3.2 URI调控阿霉素诱导的细胞凋亡54-55
• 4.4 讨论55-57
• 第五章 URI对胃癌细胞迁移的影响及机制57-63
• 5.1 实验材料和仪器57
• 5.1.1 实验试剂57
• 5.1.2 实验耗材57
• 5.1.3 实验仪器57
• 5.2 实验方法57-58
• 5.2.1 Transwell小室实验57-58
• 5.2.2 免疫印迹法检测迁移相关蛋白Vimentin和Snail的表达58
• 5.2.3 统计学分析58
• 5.3 实验结果58-61
• 5.3.1 Transwell检测干预URI胃癌细胞迁移能力的变化58-60
• 5.3.2 URI对EMT相关蛋白Vimentin和Snail表达的调节60-61
• 5.4 讨论61-63
• 结论与展望63-64
• 参考文献64-72
• 致谢72-73
• 在学期间发表的学术论文73

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1 记者 陆叶清;发现抑制胃癌细胞的重要基因[N];上海科技报;2010年

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6 王振岭;7种抗癌药体外抑制胃癌细胞的研究有新发现[N];医药经济报;2002年

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