4，-甲基-2，4-二羟基查尔酮抗肝癌作用研究

发布时间：2017-07-08 16:31

  本文关键词：4，-甲基-2，4-二羟基查尔酮抗肝癌作用研究

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【摘要】：原发性肝癌简称肝癌，是消化系统常见恶性肿瘤之一，一般好发于肝炎流行国家。在亚洲，中国和日本是肝癌的高发国家。中国肝癌的发病率较高，死亡人数每年达23万人之多，每年新患病人数占世界肝癌新患病人数55%，已成为我国高发病率、高死亡率的恶性肿瘤。 在原发性肝癌临床确诊患者中，有80%已是晚期患者，大部分患者已不适合采用手术方法切除肿物。能够手术治疗的患者,大都是采用经皮肝动脉化疗栓塞术（Transcatheter Arterial Chemoembolization, TACE）进行外科治疗。虽然外科手术治疗具有一定的效果，但仍有部分患者会发生肝癌复发、肝内或肝外肿瘤科扩散转移等情况。因此，寻求综合、有效的治疗方法已经成为原发性肝癌治疗和研究急需解决的问题。 查尔酮类化合物以1,3-二苯基丙烯酮为基本骨架结构，是植物体内合成黄酮的前体。由于查尔酮累化合物分子具有较大柔性，能与不同的生物受体结合，而表现出抗炎、抗病毒、抗氧化、镇痛、抗艾滋病、抗抑郁、抗真菌、免疫抑制等多种药理活性。有大量研究表明，查尔酮及其衍生物具有良好的抗肿瘤作用，能够从多靶点、多途径抑制多种肿瘤细胞的生物学活性。4，，-甲基-2,4-二羟基查尔酮是一种新合成的查尔酮衍生物，前期实验结果显示其对多种肿瘤细胞有较好的增殖抑制作用。 本课题将4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮的研究开发和肝癌的生物学特性研究结合在一起，研究4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对肝癌细胞增殖、诱发凋亡、侵袭与转移等生物学行为的影响，并探讨4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮治疗肝癌的相关机制，本研究将对开发新的抗肝癌药物具有重要现实意义和应用价值。 本研究在筛选4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对多种肝癌细胞抑制作用基础上，又进行了对4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮较为敏感的人肝癌HCCLM3细胞系生物学行为干预作用的研究，并对4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮抗肝癌HCCLM3细胞的作用机制进行了初步探讨，为4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对肝癌HCCLM3细胞的生物学功能的影响和作用，提供实验基础和理论依据。 1.4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对四种肝癌细胞的抑制作用 方法：利用MTT法测定4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对HepG2、Bel7402、SMMC7721和HCCLM3四种肝癌细胞株的生长抑制情况，并测定IC，50。结果：4-甲基-2,4-二羟基查尔酮对肝癌HepG2、Bel7402、SMMC7721和HCCLM3四种细胞均有增殖抑制作用，IC50分别为0.57、0.84、1.24、0.486μmol/L，其中对HCCLM3的抑制效果最为明显,与阳性药物As2O3相近。结论：4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对HepG2、Bel7402、SMMC7721和HCCLM3四种肝癌细胞均有增殖抑制作用，其中对肝癌HCCLM3细胞作用效果最好。 2.4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对HCCLM3细胞凋亡的影响 方法：Hochest染色和流式细胞术检测4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对HCCLM3细胞的凋亡作用。Westernblot检测了4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对对凋亡通路中信号物质pro-Caspase-9、Bcl-2，Bαx和Caspase-3的表达的干预作用。结果：4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮可以HCCLM3细胞发生凋亡。4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮可上调pro-Caspase-9表达量，可以使bαx基因的表达上调，bcl-2表达下调，上调Caspase-3的表达，激活凋亡信号通路。结论：4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮可以在体外抑制HCCLM3细胞的增殖，并诱导其凋亡。可以作用于pro-Caspase-9、bcl-2/bαx家族，活化Caspase-3，诱导凋亡发生。 3.4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对HCCLM3细胞侵袭和转移的影响 方法：利用细胞划痕实验、Transwell侵袭小室模型，观察4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对HCCLM3细胞侵袭能力的影响。结果：0.4μmol/L和0.8μmol/L4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮作用HCCLM3细胞12h后，能显著抑制细胞的侵袭能力（P＜0.01）。其中0.4μmol/L组的抑制率为40.05%，0.8μmol/L组的抑制率为53.72%。 结论：4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮能够在体外抑制HCCLM3细胞的侵袭和转移的能力。
【关键词】：肝癌 4 -甲基-2 4-二羟基查尔酮 细胞凋亡 抗肿瘤
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 绪论10-20
• 1.1 原发性肝癌的治疗10-12
• 1.2 查尔酮化合物抗肿瘤作用的研究进展12-17
• 1.2.1 细胞毒性12
• 1.2.2 细胞凋亡12-14
• 1.2.3 信号转导14-15
• 1.2.4 细胞周期调控15-16
• 1.2.5 抗侵袭转移16
• 1.2.6 抗肿瘤血管生成作用16-17
• 1.3 实验设计和创新点17-20
• 1.3.1 实验方案17-18
• 1.3.2 实验流程18
• 1.3.3 研究特色和创新点18-20
• 第2章 4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对肝癌细胞增殖与凋亡的影响20-37
• 2.1 材料和方法20-27
• 2.1.1 材料20-22
• 2.1.2 实验方法22-27
• 2.1.3 统计学方法27
• 2.2 结果27-34
• 2.2.1 4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对四种肝癌细胞的抑制作用27-28
• 2.2.2 不同浓度 4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对 HCCLM3 细胞形态的影响28-34
• 2.3 讨论34-36
• 2.4 小结36-37
• 第3章 4，-甲基-2,4-二羟基查尔酮对肝癌 HCCLM3 细胞侵袭与转移的影响37-42
• 3.1 材料和方法37-39
• 3.1.1 材料37
• 3.1.2 实验方法37-39
• 3.2 实验结果39-40
• 3.2.1 划痕实验39-40
• 3.3 讨论40-41
• 3.4 小结41-42
• 第4章 结论42-43
• 参考文献43-52
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果52-53
• 致谢53

【参考文献】

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1 陈晓明，罗鹏飞，胡景铃，邵培坚，周泽健，符力，汤毅，余元新;肝癌经导管肝动脉碘油抗癌药混悬剂栓塞后肝脏的延期不良反应[J];癌症;1994年01期

2 李娜;高俊岩;刘敏;;细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展[J];当代医学;2009年16期

3 赵荫农,杨南武,袁卫平,张传珉,李航;肿瘤血流监测经皮肝动脉门静脉化疗栓塞治疗大肝癌[J];肝胆外科杂志;1998年05期

4 刘晓婷;王延让;张明;;线粒体介导细胞凋亡的研究进展[J];环境与健康杂志;2013年02期

本文编号：535412