AIF-1调控乳腺癌细胞增殖的分子机制研究

发布时间：2017-07-13 11:23

  本文关键词：AIF-1调控乳腺癌细胞增殖的分子机制研究

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【摘要】：同种异体移植炎症因子-1(Allograft inflammatory factor-1,AIF-1)是由147个氨基酸组成的多肽,定位于胞浆,具有钙离子结合能力的炎症支架蛋白,主要由激活的巨噬细胞表达和分泌,是一种多功能的细胞因子,广泛参与到炎症和免疫相关的多种疾病的发生发展过程,包括器官移植、心血管疾病、免疫应答、自身免疫性疾病、生殖、肿瘤等疾病过程。乳腺癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤,其复杂的致病机理仍然不很清楚。越来越多的研究表明,在肿瘤发生发展过程中所形成的肿瘤微环境里,肿瘤相关性巨噬细胞及其分泌的各种细胞因子广泛参与到了肿瘤的发生、生长、转移和免疫逃逸等方面。实验室前人在研究炎症因子AIF-1与乳腺肿瘤的相关性时对乳腺癌临床样本分析发现AIF-1在乳腺导管癌中高表达,且与肿瘤的大小成正相关,同时体内和体外实验均证实上调AIF-1的表达,能够促进乳腺肿瘤的生长。但是AIF-1调控乳腺癌增殖的具体分子机制和所涉及的信号通路尚不清楚。ADMA28(a disintegrin and metalloproteinase 28)是一种解链蛋白-金属蛋白酶,具有蛋白水解酶的功能,有两种形式:分泌型(ADAM28s)和膜整合型(ADAM28m)。通过切割多种细胞因子或其复合物(vWF、IGFBP-3、CTGF)激活下游信号通路参与调控体内多种肿瘤的生长、转移。本论文中,首先通过优化rhAIF-1蛋白纯化体系,获得具有生物活性的高纯度重组蛋白rhAIF-1,并以MDA-MB-231和MDA-MB-361这两株乳腺癌细胞系为实验模型,直接在培养基中添加rhAIF-1后,发现rhAIF-1能够促进细胞的增殖且呈现剂量和时间依赖性。将纯化的蛋白rhAIF-1用罗丹明标记后与细胞共孵育一段时间,共聚焦成像技术分析发现这种外源的蛋白能够穿过细胞膜定位在细胞质中,进一步分析发现rhAIF-1在细胞质不均等分布,而且AIF-1虽然能够聚集在细胞核的周围,但并不能进入细胞核,这提示我们可能有其他因子参与到AIF-1调控细胞增殖的过程。为了找到rhAIF-1可能的相互作用蛋白,我们采用蛋白质免疫共沉淀技术,银染色后分析发现在70-100KDa有明显的特异性条带,通过质谱分析比对数据库中的序列后,初步确定ADAM28m为rhAIF-1可能的相互作用蛋白。接着,我们再次通过免疫共沉淀技术结合免疫印迹对rhAIF-1与ADAM28m两者之间的相互作用进行验证,发现rhAIF-1能够免疫沉淀出ADAM28m。进一步研究发现下调ADAM28m的表达,rhAIF-1促进细胞增殖的现象将被抑制。提示AIF-1可通过与ADAM28m相互作用进而激活下游信号通路参与到了乳腺癌的发生发展进程,为临床研究及靶向治疗提供了新的理论依据和应对策略。
【关键词】：AIF-1 乳腺癌 增殖 相互作用蛋白
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 1 绪论10-20
• 1.1 炎症与肿瘤的发生10-12
• 1.2 乳腺癌的研究现状12-14
• 1.3 AIF-1 的研究进展14-17
• 1.4 AIF-1 与肿瘤的发生17
• 1.5 ADAM28的研究进展17-18
• 1.6 本研究的目的和意义18-20
• 2 实验材料和仪器20-26
• 2.1 实验菌株、质粒及细胞20
• 2.2 主要仪器设备20
• 2.3 常用溶液的配制20-26
• 3 实验原理和方法26-40
• 3.1 重组蛋白rhAIF-1 的表达和纯化26-28
• 3.2 SDS-PAGE凝胶电泳28-29
• 3.3 免疫印迹29-31
• 3.4 细胞培养和计数31-32
• 3.5 细胞荧光染色32-33
• 3.6 免疫沉淀33-34
• 3.7 银染色34-35
• 3.8 质谱分析35
• 3.9 CCK-8 法检测细胞增殖35-36
• 3.10干扰质粒的构建36-38
• 3.11 电穿孔法细胞转染38-40
• 4 结果与讨论40-55
• 4.1 实验结果40-52
• 4.2 讨论52-55
• 5 全文总结55-57
• 5.1 本论文的创新点55
• 5.2 展望55-57
• 致谢57-58
• 参考文献58-64
• 附录 主要符号和缩略词表64

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3 张维彬,汪波,石灵春;中医药在现代乳腺癌治疗中的运用[J];中国中西医结合急救杂志;2002年01期

4 薛志勇;食物与乳腺癌[J];山东食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建军,郑国华;乳腺癌相关标志物的研究进展[J];山东医药;2002年33期

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7 ;新技术清晰拍摄早期乳腺癌细胞[J];上海生物医学工程;2005年04期

8 田富国;郭向阳;张华一;;乳腺癌诊治研究新进展[J];肿瘤研究与临床;2005年S1期

9 马涛,谷俊朝;血管内皮生长因子与乳腺癌的临床研究进展[J];国外医学(外科学分册);2005年01期

10 郭庆良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相关性研究进展[J];国外医学.外科学分册;2005年03期

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1 于永利;;抗乳腺癌免疫治疗融合蛋白[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

2 郭红飞;;中医治疗乳腺癌的策略[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

3 庞朋沙;伍会健;;乳腺癌治疗靶标的研究进展[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年

4 陆劲松;邵志敏;吴炅;韩企夏;沈镇宙;;新型维甲酸抑制乳腺癌细胞的生长及诱导凋亡的机制研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 刘爱国;胡冰;;乳腺癌临床治疗进展[A];安徽省抗癌协会第四次代表大会暨乳腺癌、肺癌专业委员会成立会议、安徽省肿瘤防治进展学术研讨会论文汇编[C];2001年

6 张嘉庆;王殊;乔新民;;乳腺癌的现状和远景[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年

7 刘清俊;;乳腺癌综合治疗的新进展[A];山西省抗癌协会第六届肿瘤学术交流会论文汇编[C];2003年

8 邵志敏;;21世纪乳腺癌治疗的展望[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 陈松旺;张明;;乳腺癌治疗的回顾与展望[A];西部地区肿瘤学学术会议论文汇编[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凯阳;王兆钺;阮长耿;;组织因子途径抑制物-2在乳腺癌细胞中的表达研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

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1 ;血检有望揭示乳腺癌治疗效果[N];医药经济报;2004年

2 记者 郑晓春;乳腺癌细胞扩散基因被找到[N];科技日报;2007年

3 中国军事医学科学院肿瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新疗法[N];中国妇女报;2002年

4 王艳红;抑制ＤＮＡ修补可消灭乳腺癌细胞[N];医药经济报;2005年

5 詹建;乳腺癌饮食 两个时期不一样[N];中国中医药报;2006年

6 辛君;乳腺癌扩散基因“浮出水面”[N];大众卫生报;2009年

7 记者 毛黎;美发现有效抑制乳腺癌细胞生长的分子[N];科技日报;2010年

8 记者 吴春燕　通讯员 王丽霞;乳腺癌治疗将有新途径[N];光明日报;2011年

9 王乐　沈基飞;我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物[N];科技日报;2011年

10 刘霞;一种天然分子能阻止乳腺癌恶化[N];科技日报;2011年

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2 李凯;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白调控乳腺细胞的分化并影响乳腺癌的预后[D];复旦大学;2014年

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本文编号：536767