Cereblon在慢性骨髓增殖性肿瘤中表达的临床意义

发布时间：2017-07-15 17:23

  本文关键词：Cereblon在慢性骨髓增殖性肿瘤中表达的临床意义

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【摘要】：目的:慢性骨髓增殖性肿瘤(c MPN)是一类造血干细胞起源的骨髓克隆性疾病,是一种恶性血液系统疾病。2008年,WHO论述的c MPN详细列表中包括慢性粒细胞白血病(CML)、原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、慢性嗜酸性粒细胞白血病/高嗜酸性粒细胞综合征(CEL/HES)、肥大细胞病(MCD)以及未分类型MPN(c MPN-U)。而PV、ET和PMF患者中存在JAK2基因V617F突变,此类疾病主要特点是骨髓一系或多系的髓细胞过度增殖而导致外周血中粒细胞、红细胞及血小板的增多。共同临床表现为血栓形成及出血、脾脏肿大、可转化为髓系白血病,PV、ET患者亦有骨髓纤维化的倾向。免疫调节药物(IMi Ds)是多种恶性疾病治疗方案的重要组成部分[1],沙利度胺为IMi Ds的代表性药物,早期研究认为其诱导的氧化应激及抗血管生成可能是致畸作用的机制[2,3]。近年来一项具有里程碑意义的研究发现cereblon(CRBN)为沙利度胺致畸作用的重要靶点[4]。E3蛋白酶复合体由CRBN、DDB1、ROC1、CUL4等构成,为一种泛素化连接酶。此复合物在体内能够调节DNA的复制、修复和转录[5、6、7]。CRBN为E3蛋白酶复合体的相关因子,其在体内外均能发生泛素化作用[4]。有研究表明,沙利度胺的致畸作用是通过阻断CRBN的泛素化实现的[8],当沙利度胺或者来那度胺发挥作用时,CRBN就不能形成E3复合物。沙利度胺及一些类似药物,如来那度胺和帕米磷酸盐类药物被广泛应用于慢性骨髓增殖性肿瘤、多发性骨髓瘤及骨髓增生异常综合征等恶性疾病的治疗中[9]。有关于多发性骨髓瘤(MM)的研究表明CRBN为免疫调节药物治疗所必须,CRBN表达水平低的MM患者原发抗来那度胺[8、10]。且患者对沙利度胺维持治疗的反应与CRBN表达水平呈正相关性[11、12]。然而目前有关CRBN的表达对于免疫调节剂治疗慢性骨髓增殖性肿瘤的研究尚少。本实验通过检测慢性骨髓增殖性肿瘤(PMF、PV、ET)患者骨髓液单个核细胞(BM-MNCs)中CRBN m RNA表达水平,及外周血MNCs中CRBN蛋白表达水平,分析CRBN与慢性骨髓增殖性肿瘤与沙利度胺临床疗效的关系。方法:本实验收集了河北医科大学第二医院首诊c MPNs患者的骨髓液24例(其中MF5例、PV7例、ET12例),以及外周血7例(其中MF2例、PV2例、ET3例)设为初治组。经口服沙利度胺50mg/d治疗后的c MPNs患者的外周血11例设为治疗组,其中连续口服6个月以内者为3例,6个月至12个月4例,口服时间超过12个月4例,并收集10例血液系统非恶性疾病患者骨髓液及外周血设为对照组。通过应用实时荧光定量PCR及Western Blot的方法,检测骨髓液单个核细胞(BM-MNCs)中cereblon m RNA、外周血MNCs中cereblon蛋白的表达水平。结果:1 cereblon m RNA的表达情况RT-PCR结果显示:初治组的24例c MPN患者单个核细胞中CRBN m RNA的相对表达量为(1.0333±0.2723),其中初治MF、PV、ET患者CRBN m RNA的相对表达量分别为(1.1814±0.2257)、(0.9943±0.3377)、(0.9943±0.2484),对照组CRBN m RNA的相对表达量为(0.5699±0.9474)(见Fig.1、Tabel 1)。所有c MPN患者的CRBN m RNA的相对表达水平均升高,24例患者总表达量、MF患者表达量、PV患者表达量及ET患者表达量与对照组相比均具有统计学意义(P=0.000);初治MF患者与初治PV患者CRBN m RNA的相对表达量相比无统计学差异(P=0.183),初治MF患者与初治ET患者CRBN m RNA的相对表达量相比无统计学差异(P=0.144),初治PV患者与初治ET患者CRBN m RNA的相对表达量相比无统计学差异(P=0.100)(见Tabel 1);初治组24例患者中JAK2V617F突变阳性13例,突变阴性11例,JAK2V617F突变阳性患者的CRBN m RNA相对表达量为(0.9743±0.2912),阴性为(1.1031±0.2427),两组相比无统计学差异(P=0.259),两组与对照组相比具有统计学意义(P=0.000)(见Fig.2、Tabel 2)。2 cereblon蛋白表达情况Western Blot结果显示:初治组7例、治疗组11例、对照组10例的cereblon蛋白表达量分别为(1.550±0.223)pg/ml、(1.028±0.182)pg/ml、(0.911±0.161)pg/ml(见Fig.3、Tabel 3)。其中治疗组中口服沙利度胺50mg/d连续6个月以内者、6个月至12个月者,及大于12个月者的CRBN蛋白表达量分别为(1.181±0.133)pg/ml、(0.996±0.571)pg/ml、(0.945±0.248)pg/ml,随着持续口服沙利度胺时间的增长,CRBN蛋白表达量呈下降趋势(见Fig.4、Tabel 4)。所有c MPN患者CRBN蛋白的表达量均升高,初治组与治疗组相比差异具有统计学意义(P=0.000),初治组与对照组相比差异具有统计学意义(P=0.000),治疗组CRBN蛋白的表达水平较对照组有升高趋势,但其差异不具有统计学意义(P=0.160)(见Tabel 3)。将未服用沙利度胺治疗的初治组患者7例设为1组,持续口服沙利度胺50mg/d治疗6个月以内的患者3例设为2组,持续治疗6-12个月的患者4例设为3组,持续治疗时间超过12个月的患者4例设为4组,正常对照组10例设为5组,则1-5组的cereblon蛋白表达量分别为(1.550±0.223)pg/ml、(1.181±0.133)pg/ml、(0.996±0.571)pg/ml、(0.945±0.248)pg/ml、(0.911±0.161)pg/ml,各组之间CRBN蛋白的表达量呈下降趋势,其中1组与2组相比差异具有统计学差异(P=0.007);与3、4、5组相比差异亦具有统计学意义(P=0.000),2组与3、4组相比差异不具有统计学意义(P=0.197、P=0.104),与5组相比差异具有统计学意义(P=0.034);3组与4、5组相比均不具有统计学差异(P=0.697、P=0.435);4、5组间相比差异不具有统计学意义(P=0.749)(见Tabel 4)。3 cereblon m RNA与cereblon蛋白表达的相关性初治组中7例患者的cereblon m RNA的相对表达量分别为1.0000、1.1617、0.5428、1.1327、1.1759、1.4321、0.8564,cereblon蛋白的表达水平分别为1.566 pg/ml、1.431 pg/ml、1.164 pg/ml、1.632 pg/ml、1.732 pg/ml、1.849 pg/ml、1.479 pg/ml。Cereblon m RNA表达与cereblon蛋白表达呈正相关性,相关系数为0.714,具有统计学意义(P=0.024)(见Fig.5)。结论:1新诊断的慢性骨髓增殖性肿瘤(c MPN)患者的CRBN m RNA及蛋白的表达水平高于正常人及经沙利度胺治疗后的c MPN患者。2新诊断的c MPN患者中JAK2V617F突变阳性和阴性患者的CRBN基因表达情况无统计学差异,证明两者之间不具有相关性。3随着口服沙利度胺治疗时间的延长,CRBN蛋白表达水平呈逐渐下降趋势。4 CRBN基因与蛋白的表达可能具有一定相关性。
【关键词】：慢性骨髓增殖性肿瘤 cereblon IMIDs JAK2V617F突变 沙利度胺
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.3
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文缩写13-14
• 前言14-15
• 材料与方法15-24
• 结果24-27
• 附图27-31
• 附表31-33
• 讨论33-35
• 结论35
• 参考文献35-37
• 综述 慢性骨髓增殖性肿瘤研究进展37-50
• 参考文献45-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 ;Delayed hepatocarcinogenesis through antiangiogenic intervention in the nuclear factor-kappa B activation pathway in rats[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年02期

2 周玮;张育;;沙利度胺的作用机制及抗类风湿关节炎作用研究进展[J];医药导报;2007年04期

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本文编号：544942