miR-139-5p靶向TGF-β1调控EMT抑制肝癌细胞侵袭转移

发布时间：2017-07-16 10:19

  本文关键词：miR-139-5p靶向TGF-β1调控EMT抑制肝癌细胞侵袭转移

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【摘要】：目的:研究肝癌中mi R-139-5P与转化生长因子β1(TGF-β1)之间的表达关系,分析TGF-β1是否是mi R-139-5P的靶基因,阐明mi R-139-5P靶向TGF-β1调控上皮间质转化(EMT)相关信号通路,抑制肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法:首先通过生物信息学方法,发现20个mi RNAs可能是TGF-β1的潜在靶mi RNAs;进一步计算分析后发现,mi R-139-5P是TGF-β1的最佳结合靶mi RNA。在56例肝癌组织和20例癌旁组织中,通过免疫组化检测TGF-β1的表达水平;通过q RT-PCR检测mi R-139-5P的表达,Western blot检测TGF-β1的表达,分析两者之间的表达相关性;在高转移和低转移的肝癌细胞株中,q RT-PCR检测mi R-139-5P的表达,Western blot检测TGF-β1、N-cadherin、Vimentin表达,分析mi R-139-5P和三个蛋白表达之间的关系;在重组细胞株Hep G2-mi R-139-5p mimics、Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2中,q RT-PCR检测mi R-139-5P的表达,western blot检测TGF-β1的表达,分析mi R-139-5P表达是否与TGF-β1的3`UTR端结合;Transwell方法检测mi R-139-5P表达改变后的肝癌重组细胞系侵袭能力的改变。结果:(1)生物信息学方法发现与TGF-β1结合的靶mi RNAs有20个;其中,mi R-139-5p是与TGF-β1的结合稳定性最高,特异性最好的靶mi RNA。(2)肝癌组织中TGF-β1表达阳性率为80.4%(45/56),癌旁正常肝组织中表达阳性率为15.0%(3/20),两者之间的阳性率比较有显著性差异(P0.01)。(3)肝癌组织中mi R-139-5p低表达,而癌旁组织中mi R-139-5p高表达,两者之间的差异有统计学(P0.01);肝癌组织中TGF-β1高表达,癌旁组织中低表达,两者之间的差异有统计学(P0.01)。mi R-139-5p和TGF-β1表达之间存在负相关。(4)高转移细胞株MHCC97-H中mi R-139-5p低表达,低转移细胞株MHCC97-L中mi R-139-5p高表达,两者之间的表达差异有统计学意义(P0.01);高转移细胞株MHCC97-H中TGF-β1、N-cadherin、Vimentin均高表达,低转移细胞株MHCC97-L中TGF-β1、N-cadherin、Vimentin低表达,三个蛋白的表达水平在不同转移细胞系中有显著性差异(P0.01)。(4)Hep G2-mi R-139-5p mimics细胞株中mi R-139-5p水平表达增高,而TGF-β1表达水平下调(P0.05);而在Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2三个细胞株中,mi R-139-5p表达水平无明显差异,TGF-β1表达水平也没有明显差异。mi R-139-5p能和TGF-β1的3`UTR位点结合。(5)mi R-139-5p高表达细胞株中侵袭细胞计数明显低于其他三组(P0.01),Hep G2-mi R-Scramble、Hep G2-mi R-139-5p-PM、Hep G2三个细胞株中mi R-139-5p表达水平无明显差异,他们之间侵袭细胞计数也无显著性差异(P0.05)。结论:(1)TGF-β1在肝癌组织中表达增高,与肝癌发病有关。(2)肝癌组织和细胞中mi RNA-139-5p与TGF-β1的表达呈负相关,TGF-β1可能是mi RNA-139-5p的靶基因。(3)mi RNA-139-5p通过靶向结合TGF-β1的3`UTR位点,下调TGF-β1、N-cadherin、Vimentin的表达。(4)mi RNA-139-5p下调TGF-β1后,调控EMT信号通路,抑制肝癌细胞的侵袭转移。
【关键词】：miRNA 肝癌 侵袭转移 TGF-β1 EMT信号通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-17
• 技术路线17-18
• 第2章 材料与方法18-24
• 2.1 材料18-20
• 2.2 方法20-24
• 第3章 结果24-30
• 第4章 讨论30-38
• 第5章 结论38-40
• 参考文献40-52
• 主要缩略英文索引52-54
• 综述 TGF-β在肝细胞癌靶向治疗中作用54-64
• 参考文献60-64
• 作者攻读学位期间的科研成果64-65
• 致谢65

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本文编号：548238