载血管生长因子壳聚糖纳米粒在防治放射性皮肤损伤中的应用及其作用机制的探讨

发布时间：2017-07-16 19:14

  本文关键词：载血管生长因子壳聚糖纳米粒在防治放射性皮肤损伤中的应用及其作用机制的探讨

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【摘要】：目的:制备载有血管生长因子的壳聚糖纳米粒并探讨其在放射性皮肤损伤中的应用及其作用机制。方法:(1)大鼠臀部接受45Gy X射线照射建立放射性皮肤损伤模型,观察大鼠辐射区的大体改变和微循环状态随时间的变化。(2)将血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)分别局部皮下注射应用于放射性皮肤损伤大鼠模型,对比大鼠模型的大体观、微血管计数及一步法TUNEL凋亡染色,筛选出治疗效果最优的血管生长因子。(3)三聚磷酸钠(tripolyphosphate,TPP)、壳聚糖(chitosan,CS)与筛选出的血管生长因子结合,离子交联法制备成纳米粒,检测其理化性质,探讨其体外释放规律。(4)将配制成的载血管生长因子壳聚糖纳米粒干燥重悬后,局部皮下注射入大鼠辐射部位,对比等量血管生长因子连续注射及一次性注射的给药方式,观察电离辐射区皮肤变化,初步评价其对放射性皮肤损伤发生发展及愈合的影响。(5)通过对比各组微循环状态、血管内皮细胞损伤标志物血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)含量与细胞凋亡蛋白caspase3表达程度,进一步探讨其在放射性皮肤损伤中的作用机制。免疫组织化学技术(immunohistochemistry)、免疫印迹法(Western blotting)对血管生长因子定性定量验证。结果:(1)大鼠经45Gy X射线照射后,2周脱毛,4周皮肤形成溃疡,两个月溃疡创面逐渐愈合,随时间变化微循环障碍逐渐加重。(2)辐照后两周,VEGF组辐照区未见明显变化,而bFGF组和HGF组部分脱毛,VEGF组可见较多微血管且较少的凋亡细胞,差异有统计学意义(P0.01)。(3)采用离子交联法制备的载VEGF165壳聚糖纳米粒粒径400nm左右,Zeta电位25.3V,包封率85%左右,体外可平稳释放30天,释放率达90%。(4)VEGF165以纳米颗粒的形式注射应用于体内后,其脱毛、溃疡形成所需的天数与以连续注射的方式相当,两者间差异不显著(P0.05),但明显多于对照组及一次性注射的用药方式(P0.01),创面愈合所需天数较其他三组少,差异有统计学意义(P0.05)。(5)VEGF165以纳米颗粒及连续注射的方式应用后两周开始,微血管计数和vWF含量多于对照组和一次性单纯注射VEGF165组,差异有统计学意义(P0.01);caspase3表达程度弱于对照组和一次性单纯注射VEGF165组。经验证,VEGF165以纳米颗粒及连续注射的方式应用后,组织内VEGF165的含量明显多于对照组和一次性单纯注射VEGF165组。结论:(1)当X射线放射剂量为45Gy时,大鼠可形成明显的皮肤损伤创面,微血管损伤与微血栓形成随时间程度逐渐加深,具有长期性、持久性、潜在性和进行性作用的特征。(2)VEGF165能够有效地延缓大鼠模型放射性皮肤损伤的发生发展。(3)离子交联法制备的载VEGF165壳聚糖纳米粒,不仅具有较高的包封率,而且理化性质稳定,体外释放平稳,并且在大鼠模型体内起到了一定的缓释作用,实现了VEGF165的可持续作用。(4)载VEGF165壳聚糖纳米粒可能是通过保护血管内皮细胞,抑制内皮细胞凋亡,防止血栓形成,延缓放射性皮肤损伤的发生发展,并且促进放射性皮肤损伤的愈合。
【关键词】：放射性皮肤损伤 壳聚糖纳米粒 VEGF 血管内皮细胞 凋亡
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55;R758.13
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-13
• 参考文献11-13
• 第一部分 载血管生长因子壳聚糖纳米粒的构建及理化性质的研究13-30
• 1 材料与方法13-19
• 2 结果19-25
• 3 讨论25-27
• 4 结论27
• 参考文献27-30
• 第二部分 载血管生长因子壳聚糖纳米粒的体内应用及作用机制的探讨30-48
• 1 材料与方法30-35
• 2 结果35-43
• 3 讨论43-45
• 4 结论45
• 参考文献45-48
• 全文总结48-49
• 综述49-60
• 参考文献53-60
• 缩略词表60-61
• 研究生期间发表及待发表的论文61-62
• 致谢62-63

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本文编号：550147