硼替佐米与高三尖杉酯碱在K562细胞中的联合作用及机制研究

发布时间：2017-07-17 22:18

  本文关键词：硼替佐米与高三尖杉酯碱在K562细胞中的联合作用及机制研究

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【摘要】：研究目的:(1)观察硼替佐米(Bortezomib,BTZ)、高三尖杉酯碱(Homoharringonine,HHT)两者单药及联合对K562细胞增殖和凋亡的影响。(2)探讨硼替佐米及高三尖杉酯碱对K562细胞的联合作用机制与Bcl-2、Bax、Mcl-1蛋白表达量的关系。研究方法:将K562细胞株按不同处理分为4组:(1)BTZ(20nmol/L)组(2)HHT(40ng/m L)组(3)BTZ(20nmol/L)+HHT(40ng/m L)联合组(4)对照组。1、采用MTT方法检测各处理组中K562细胞增殖抑制率的变化。2、采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测各处理组中K562细胞早期凋亡率的变化。3、采用Western Blot方法测定各处理组中Bcl-2、Bax及Mcl-1蛋白相对表达量的变化。实验结果:1、在BTZ的0~160nmol/L浓度范围内,K562细胞的增殖抑制率随BTZ浓度的增加而增加(与对照组比较,p0.05)。在24~72h内,同浓度BTZ作用于K562细胞的增殖抑制率随作用时间的延长而增加(组间比较p0.05)。BTZ作用K562细胞24h、48h、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为91.36nmol/L、44.25nmol/L、20.34nmol/L。2、在HHT的0~320ng/ml浓度范围内,K562细胞的增殖抑制率随HHT浓度的增加而增加(与对照组比较,p0.05)。在24~72h内,同浓度HHT作用于K562细胞的增殖抑制率随作用时间的延长而增加(组间比较p0.05)。HHT作用K562细胞24h、48h、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为148.92ng/ml、61.48ng/ml、35.65ng/ml。3、20nmol/L BTZ作用K562细胞24h、48h、72h后的增殖抑制率分别为24.29±1.38、38.36±0.97、49.30±1.66(与对照组比较,p0.001);40ng/m L HHT作用K562细胞24h、48h、72h后的增殖抑制率(%)分别为29.10±1.54、39.78±1.86、50.71±2.26(与对照组比较,p0.001);BTZ+HHT联合作用K562细胞24h、48h、72h后的增殖抑制率(%)分别为48.58±2.18、69.87±1.86、84.48±1.84。BTZ、HHT单药与联合组比较有差异(p0.01)。进一步行相互作用分析表明在不同时间点BTZ+HHT联合组增殖抑制率均有IR(BTZ+HHT)IR(BTZ)+IR(HHT)-IR(BTZ)*IR(HHT)。4、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的早期凋亡率(%)分别为2.36±0.56、8.09±0.81、8.93±0.82、21.13±1.90。BTZ及HHT单药组高于对照组(p0.05),联合组均高于BTZ、HHT单药组(p0.05)。5、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的Bcl-2蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、0.77±0.28、0.78+0.04、0.18±0.02(与对照组比较,p0.05)。BTZ、HHT单药组低于对照组(p0.05),联合组低于BTZ及HHT单药组(p0.05)。6、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的Bax蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.77±0.09、2.02±0.09、2.53±0.12。BTZ、HHT单药组高于对照组(p0.05),联合组高于BTZ及HHT单药组(p0.05)。7、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的Mcl-1蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.25±0.05、0.75±0.03、0.87±0.02。不同处理组Mcl-1蛋白相对表达量高低:BTZ组对照组BTZ+HHT联合组HHT组(组间比较p0.05)。结论:1、BTZ、HHT对K562细胞株均有抑制增殖作用,且均呈剂量、时间依赖性。BTZ与HHT联合可起协同抑制细胞增殖效应。2、BTZ、HHT对K562细胞株均有诱导凋亡作用,BTZ与HHT联合诱导凋亡效应更明显。3、BTZ、HHT可下调K562细胞Bcl-2蛋白表达,两药联合时Bcl-2蛋白下调更明显。4、BTZ、HHT可上调K562细胞Bax蛋白表达,两药联合时Bax蛋白上调更明显。5、HHT可通过下调Mcl-1蛋白表达增加K562细胞对BTZ作用的敏感性。
【关键词】：硼替佐米 高三尖杉酯碱 K562 慢性粒细胞白血病 联合效应
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-22
• 2.1 材料13-15
• 2.1.1 细胞系13
• 2.1.2 实验药物及配制方法13
• 2.1.3 主要试剂13-14
• 2.1.4 主要抗体14
• 2.1.5 实验主要仪器14-15
• 2.1.6 实验主要耗材15
• 2.2 实验方法15-21
• 2.2.1 细胞培养15
• 2.2.2 BTZ、HHT单药对K562细胞增殖的影响15-16
• 2.2.3 联合药物实验16-21
• 2.3 统计学分析21-22
• 第3章 结果22-30
• 3.1 BTZ、HHT单药对K562细胞增殖的影响22-24
• 3.1.1 BTZ对K562细胞增殖的影响22-23
• 3.1.2 HHT对K562细胞增殖的影响23-24
• 3.2 联合药物实验24-30
• 3.2.1 BTZ、HHT联合对K562细胞增殖的影响24-25
• 3.2.2 BTZ、HHT联合对K562细胞早期凋亡率的影响25-27
• 3.2.3 BTZ、HHT联合对K562细胞的Bcl-2、Bax、Mcl-1 蛋白表达水平的影响27-30
• 第4章 讨论30-37
• 4.1 BTZ、HHT单药对K562细胞增殖的影响30-31
• 4.1.1 BTZ对K562细胞增殖的影响30-31
• 4.1.2 HHT对K562细胞增殖的影响31
• 4.2 BTZ、HHT联合对K562细胞增殖的影响31-32
• 4.3 BTZ、HHT联合对K562细胞凋亡的影响32
• 4.4 BTZ联合HHT对K562细胞的凋亡效应机制与Bcl-2 家族蛋白的关系2232-37
• 4.4.1 BTZ联合HHT诱导K562细胞凋亡的机制与Bcl-2、Bax蛋白表达水平的关系34-35
• 4.4.2 HHT通过抑制Mcl-1 蛋白表达提高K562细胞对BTZ的敏感性35-37
• 第5章 结论与展望37-38
• 5.1 结论37
• 5.2 展望37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 攻读学位期间的研究成果43-44
• 综述44-51
• 参考文献49-51

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本文编号：554880