胃癌中miR-148a通过DNMT1调控E-cadherin表达的研究

发布时间：2017-07-18 00:14

  本文关键词：胃癌中miR-148a通过DNMT1调控E-cadherin表达的研究

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【摘要】：背景:MicroRNAs(miRNAs)是一类高度保守的内源性单链非编码小RNA,它们通过与目的基因的3’端非编码区域完全或不完全互补结合,从而调控目的基因的表达。目前,许多研究已经发现miRNAs通过影响靶基因的表达从而进一步影响肿瘤的增殖、凋亡、转移和侵袭生物行为,继而在各种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用。一些miRNAs也已经被证实正在胃癌中表达失调,并且参与胃癌的发生和发展。MicroRNA-148a(miR-148a)是其中一个关键的miRNA,它在胃癌组织中表达显著下调,并能抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。抑癌基因CDH1编码的E-钙黏蛋白(E-cadherin)是一种经典的黏附连接蛋白,其表达缺失能导致肿瘤细胞的转移侵袭能力增强。研究已经证实在胃癌中,E-cadherin的表达显著下调,且其低表达与基因启动子区的异常超甲基化密切相关。并且,有研究表明miR-148a能通过调控E-cadherin的表达抑制胃癌的转移。然而,miR-148a调控E-cadherin的具体机制目前仍不清楚。目的:研究胃癌中miR-148a与E-cadherin的表达相关性,并进一步探索miR-148a对E-cadherin的内在调控机制。方法:通过实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)或免疫印迹(Western blot)检测胃癌组织中E-cadherin及miR-148a的表达,使用Pearson相关分析检测E-cadherin与miR-148a表达的相关性;通过去甲基化药物处理,研究启动子异常甲基化与E-cadherin表达的关系;通过转染miR-148a mimics提高miR-148a的表达水平,转染DNMT1 siRNA干扰DNMT1的表达水平,进一步研究miR-148a对E-cadherin的调控机制。结果:1.qRT-PCR及western blot结果表明75%(15/20)的胃癌组织中E-cadherin的表达较正常胃黏膜组织低。另外,miR-148a及E-cadherin mRNA的表达水平呈显著的正相关;2.miR-148a mimics转染入胃癌细胞系后,细胞系中miR-148a的表达水平显著升高,而E-cadherin蛋白的表达水平显著升高;3.胃癌细胞系MGC-803及SGC-7901接受去甲基化药物5-aza-dC处理后,两种胃癌细胞中E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著上升;4.DNMT1 siRNA转染入胃癌细胞系MGC-803及SGC-7901后,通过qRT-PCR及western blot测定DNMT1及E-cadherin的蛋白水平。结果显示转染后DNMT1的表达显著降低,而E-cadherin的表达显著上调。结论:miR-148a通过下调DNMT1的表达进一步上调E-cadherin的表达水平,从而影响胃癌细胞的转移和侵袭。
【关键词】：胃癌 DNA甲基化转移酶1 miR-148a E-cadherin
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-24
• 1、实验材料12-16
• 1.1 主要实验仪器和耗材12-13
• 1.2 主要试剂13-14
• 1.3 抗体14
• 1.4 主要试剂配置14-16
• 2、实验方法16-23
• 2.1 临床病理标本采集及细胞系来源16
• 2.2 细胞培养16-18
• 2.3 组织及细胞总RNA的提取（Trizol法）18
• 2.4 实时荧光定量PCR和逆转录PCR18-22
• 2.5 组织与细胞系中总蛋白的提取22
• 2.6 蛋白免疫印迹法22-23
• 3、统计学分析23-24
• 结果24-27
• 1、E-CADHERIN在胃癌组织低表达，，且其表达与MIR-148A的表达呈正相关24
• 2、MIR-148A的过表达导致E-CADHERIN蛋白的表达上调24
• 3、去甲基化药物导致E-CADHERIN的表达上调24
• 4、DNMT1沉默导致E-CADHERIN表达上调24-27
• 讨论27-29
• 结论29-30
• 参考文献30-32
• 综述32-43
• 1 背景32-33
• 2 DNA甲基化33-34
• 2.1 DNA甲基化和甲基化转移酶33
• 2.2 DNA甲基化与胃癌33-34
• 3.MICRORNA和肿瘤34-35
• 4.胃癌中MIRNAS的表达失调35-36
• 5.胃癌MIRNAS的异常甲基化36-37
• miR-124a36
• miR-34b/miR-34c36-37
• miR-148a37
• 6 结论和展望37-38
• 参考文献38-43
• 附录43-44
• 攻读硕士期间发表文章情况44-45
• 致谢45-46

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本文编号：555221