EGFL7通过上皮-间质转化促进胰腺癌侵袭的实验研究

发布时间：2017-07-19 23:10

  本文关键词：EGFL7通过上皮-间质转化促进胰腺癌侵袭的实验研究

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【摘要】：第一部分EGFL7在人胰腺癌细胞株中的表达目的研究Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌细胞EGFL7的表达状况,为后续研究做好准备。方法常规培养Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌细胞,Real-time PCR、Western blot方法检测EGFL7 m RNA和蛋白的表达。结果Real-time PCR显示上述4株胰腺癌细胞中EGFL7 m RNA相对量分别为:1.73±0.15、2.26±0.20、1.53±0.10、1.00±0.10,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot显示上述4株胰腺癌细胞中EGFL7蛋白相对量分别为:0.26±0.03、0.32±0.04、0.23±0.02、0.15±0.02,差异有统计学意义(P0.05),其中PACN-1细胞的EGFL7表达量最高。结论在Patu8988、PANC-1、Bx PC-3、Capan-1胰腺癌细胞中,PANC-1细胞EGFL7表达量最高。第二部分靶向EGFL7的si RNA干扰质粒的构建与筛选目的构建并筛选靶向EGFL7沉默效果最佳的si RNA干扰质粒。方法根据Gen Bank中EGFL7的基因序列,设计4条靶向人EGFL7的si RNA序列,与干扰载体共转染PANC-1细胞,Real-time PCR、Western blot筛选出最佳干扰序列。结果靶向EGFL7基因重组si RNA干扰质粒构建成功,并能有效抑制EGFL7的表达,且EGFL7-si RNA-1效果最佳。结论EGFL7-si RNA-1干扰质粒对PANC-1细胞EGFL7的沉默效果最佳。第三部分EGFL7对胰腺癌PANC-1细胞侵袭的影响及机制探讨.目的研究EGFL7靶向沉默后人胰腺癌PANC-1细胞侵袭能力的改变,及EMT相关标志物表达的改变。方法实验细胞分为PANC-1(空白对照组)、NC-PANC-1(阴性对照组)、si-PANC-1(实验组)三组。各组细胞连续培养120h,分别在转染24h、48h、72h、96h、120h后MTT法检测增殖活性。转染后72h,Transwell检测各组细胞的侵袭能力。Real-time PCR、Western blot检测E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin m RNA和蛋白的表达。结果MTT实验显示,转染24h、48h、72h、96h、120h后3组细胞的增殖活性差异无统计学意义(P0.05)。Transwell侵袭实验显示,转染后72小时3组的侵袭细胞数分别为79±5.0、70.2±4.0、30±2.5,差异有统计学意义(P0.05)。Real-time PCR和Western blot显示:si-PANC-1组E-Cadherin m RNA及蛋白较其他两组显著升高(P0.05),而NCadherin、Fibronectin、Vimentin较其他两组显著降低(P0.05);NC-PANC-1组与PANC-1组间E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin m RNA及蛋白差异无统计学意义(P0.05)。结论EGFL7可通过EMT过程促进胰腺癌的侵袭。
【关键词】：胰腺癌 EGFL7 上皮-间质转化 E-Cadherin
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 参考文献11-13
• 第一部分 EGFL7 在人胰腺癌细胞株中的表达13-26
• 材料13-15
• 方法15-20
• 结果20-22
• 讨论22-23
• 结论23
• 参考文献23-26
• 第二部分 靶向EGFL7 的SIRNA干扰质粒的构建与筛选26-38
• 材料26-28
• 方法28-33
• 结果33-35
• 讨论35-36
• 结论36-37
• 参考文献37-38
• 第三部分 EGFL7 对胰腺癌PANC-1 细胞侵袭的影响及机制探讨38-47
• 材料38-39
• 方法39-41
• 结果41-43
• 讨论43-45
• 结论45
• 参考文献45-47
• 全文总结47-48
• 综述 EGFL7 在肿瘤侵袭转移中的研究进展48-54
• 参考文献52-54
• 全文缩略词54-55
• 攻读学位期间公开发表的论文55-56
• 致谢56-57

【参考文献】

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1 桑娜;李景和;王宽松;;EGFL7与肿瘤研究新进展[J];现代生物医学进展;2009年23期

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本文编号：565242