ΔNp73α基因转染树突状细胞抗乳腺癌细胞的免疫效应

发布时间：2017-07-20 03:02

  本文关键词：ΔNp73α基因转染树突状细胞抗乳腺癌细胞的免疫效应

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【摘要】：目的研究ΔNp73α基因转染树突状细胞(DC)诱导的特异性抗乳腺癌免疫效应。方法取健康人脐带血细胞经细胞因子粒细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)、白细胞介素-4(rh IL-4)、肿瘤坏死因子(rh TNF-α)诱导培养DC,流式细胞仪(FCM)检测DC成熟前后特异性抗原CD1a、CD83的表达变化情况。利用脂质体lipofectamine2000将ΔNp73α转染至DC,经Western blot检测转染后蛋白表达情况。将转染DC与自体T细胞共培养诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。FCM检测转染DC与T细胞共培养前后的淋巴细胞亚群变化情况;ELISA法检测活化T细胞分泌IFN-γ水平;乳酸脱氢酶法(LDH)检测T细胞对乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤作用。使用SPSS17.0软件对实验数据进行统计学分析。结果1、脐带血来源的单核细胞(MNC)在细胞因子rh GM-CSF、rh IL-4、rh TNF-α诱导下,于第7天分化为成熟DC。2、成熟DC的特异性抗原CD1a表达约占58.78%,CD83约占76.61%,分别与未成熟DC的CD1a阳性率20.34%及CD83阳性率15.13%比较,差异有显著统计学意义(P0.01)。3、Western blot检测到ΔNp73α转染组有一条特异性条带表达。4、T-DC组、T-DC-ΔNp73α组CD4+T淋巴细胞阳性率分别为(29.12±0.61)%、(31.52±0.97)%,CD8+T淋巴细胞的阳性率分别为(18.82±1.29)%、(45.71±0.74)%,都高于T淋巴细胞组CD4+T阳性率(18.31±1.81)%及CD8+T阳性率(18.59±2.18)%,并且T-DC组与T-DC-ΔNp73α组中CD4+占CD3+T细胞含量比较差异无统计学意义(P0.05),而CD8+占CD3+T细胞含量比较差异显著(P0.01)。5、转染ΔNp73α的DC与T细胞共培养诱导的特异性CTL对乳腺癌细胞MDA-MB-231杀伤作用高于DC组(P0.05),分泌IFN-γ的水平升高,与pc DNA组及DC组比较均有显著统计学意义(P0.01)。结论1、MNC经细胞因子诱导成功培养出成熟DC细胞。ΔNp73α转入DC细胞并获得表达,说明制备ΔNp73α-DC疫苗的可行性。2、以ΔNp73α转染DC制备的DC疫苗,具有显著诱导CTL杀伤乳腺癌细胞的作用,进一步说明制备ΔNp73α-DC疫苗的有效性。
【关键词】：ΔNp73α DC 淋巴细胞毒性T细胞 疫苗
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语8-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-21
• 结果21-25
• 讨论25-28
• 结论28-29
• 本研究创新性的自我评价29-30
• 参考文献30-33
• 附录33-45
• 一、文献综述33-42
• 参考文献39-42
• 二、在学期间科研成绩42-43
• 三、致谢43-44
• 四、个人简介44-45

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本文编号：565933