miR-92a在结肠癌中的表达及对HT-29细胞化疗药敏性的影响

发布时间：2017-07-20 03:12

  本文关键词：miR-92a在结肠癌中的表达及对HT-29细胞化疗药敏性的影响

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【摘要】：mi RNA是一类内源性表达的长度为17~25个核苷酸的非编码型小RNA,主要通过与靶基因的3’端的非编码区进行不完全配对结合,从而抑制靶基因m RNA翻译或者直接使其降解,参与调控细胞凋亡、个体发育、细胞增殖和分化等生命活动,与肿瘤的发生发展、侵袭、耐药产生等病理进程密切相关。已证实,mi RNA在组织和细胞中的表达表现为显著的组织特异性、肿瘤相关性和表达稳定性。结肠癌细胞中,特异性mi RNA过表达或沉默与结肠癌的发展、演进、肿瘤细胞的转移及耐药性有关。mi R-92a作为mi R-17~92簇的重要成员,在多种肿瘤中存在异常表达,并与肿瘤的发生发展,肿瘤细胞的增殖和凋亡相关。我们运用荧光定量PCR的方法检测mi R-92a在大肠癌组织中的表达并探讨其临床意义,在细胞实验中经过筛选选出对化疗耐药的细胞株HT-29,其中mi R-92a高表达,运用脂质体及反义寡核苷酸共转染的方法拮抗mi R-92a在HT-29细胞中的表达,检测细胞的化疗敏感性改变。目的:研究mi R-92a在结肠癌组织中的表达情况及其临床意义,并分析拮抗mi R-92a的表达对HT-29细胞化疗药敏性的影响。方法:1、应用荧光定量PCR法检测75例结肠癌组织中mi R-92a的表达。对75例结肠癌患者进行随访,以无病生存时间(DFS)和总生存时间(OS)为评价指标,Kaplan-Meier生存曲线分析mi R-92a表达与结肠癌患者术后无病生存期和总生存期的关系,Log-rank test比较生存曲线的差异。2、传代培养HT-29、SW-480、HCT-8结肠癌细胞株,取对数生长期的细胞,提取各组细胞总RNA并反转录,用荧光定量PCR法检测各细胞株中mi R-92a的表达,筛选出表达最高的细胞株,转染mi R-92a inhibitor后再检测mi R-92a表达降低证明拮抗有效,进行后续实验。3、在riboFECT介导下,将mi R-92a inhibitor转染入HT-29细胞中,脂质体组只转染脂质体,阴性对照组转染阴性对照寡核苷酸,空白组不做任何处理,4组细胞分别予奥沙利铂处理,作用相应时间后应用CCK-8法检测细胞的增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:1、荧光定量PCR实验发现,结肠癌组织中mi R-92a的表达较癌旁组织明显增高,与患者肿瘤部位、浸润深度、淋巴结转移、有无脉管癌栓、分化程度无关。mi R-92a低表达患者DFS及OS优于高表达者,差异具有统计学意义(P值均0.0001),mi R-92a高表达者和低表达者中位无病生存期分别为17月和31月,总生存期分别为20月和34月。2、mi R-92a在结肠癌细胞株HT-29、SW-480、HCT-8中表达倍数(相对于普通结肠细胞株)分别为3.82±0.32、2.15±0.71、1.43±0.41,其中HT-29细胞株的表达量最高,转染mi R-92a inhibitor后HT-29的mi R-92a表达量降低为0.05±0.10,与转染前存在明显差异,P0.05。3、HT-29细胞转染mi R-92a inhibitor并经奥沙利铂作用后细胞增殖能力低于相应时间点的空白组细胞、脂质体组细胞及阴性对照组细胞,差异具有统计学意义,P0.05。抑制mi R-92a表达后,细胞72h凋亡率高于对照组细胞,差异具有统计学意义,P0.05。结论:mi R-92a在结肠癌组织中表达较正常结肠组织显著升高,其高表达水平预示结肠癌患者更短的无病生存期和总生存期。mi R-92a在不同结肠癌细胞株中表达水平不同,可能影响细胞对化疗药物敏感性,拮抗其表达可以显著降低细胞化疗后增殖能力,提高细胞凋亡率。因此mi R-92a可能成为结肠癌患者出现化疗耐药的新治疗靶点。
【关键词】：miR-92a 大肠癌 增殖 凋亡 化疗 无病生存期 总生存期
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、miR-92a在结肠癌组织中的表达及临床意义15-33
• 1.1 对象与方法15-22
• 1.1.2 实验材料15-16
• 1.1.3 实验方法及步骤16-19
• 1.1.4 结肠癌患者术后随访19
• 1.1.5结果判定19-21
• 1.1.6统计分析21-22
• 1.2 结果22-31
• 1.3 讨论31-32
• 1.4 小结32-33
• 二、mi R-92a 的表达对 HT-29 细胞化疗药敏性的影响33-49
• 2.1 对象与方法33-41
• 2.1.1 实验材料33-34
• 2.1.2 实验方法34-38
• 2.1.3 结果判定38-40
• 2.1.4 统计分析40-41
• 2.2 结果41-46
• 2.3 讨论46-48
• 2.4 小结48-49
• 结论49-50
• 参考文献50-55
• 发表论文和参加科研情况说明55-56
• 附录56-59
• 综述 mi R-17~92簇在恶性肿瘤诊治中的研究进展59-74
• 综述参考文献69-74
• 致谢74

【共引文献】

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本文编号：566019