基于适配子的小肝癌诊断研究

发布时间：2017-07-20 20:23

  本文关键词：基于适配子的小肝癌诊断研究

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【摘要】：背景与目的:小肝癌没有明显的临床症状,AFP大多为阴性,其临床诊断主要依赖B超、CT及MRI等影像学检查。Meta分析显示影像学检查诊断肝癌的敏感度和特异度只有77%~84%,对于小肝癌更不理想。血清标志物检测是简便易行的肿瘤筛查诊断方法,但目前仍缺乏有临床价值的小肝癌标志物。适配子是生物分子的单链核酸配体,通过SELEX技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选获得,能高特异性、高亲和力结合靶分子,在疾病诊断中应用前景良好。本课题组在前期研究中,以肝癌血清为靶标筛选到一批适配子,其中部分适配子对肝癌血清具有良好的结合特异性。本研究评价其中2个适配子AP-HCS-9-74和AP-HCS-9-132对小肝癌的诊断价值,并与AFP等传统肿瘤标志物及DKK1和MDK两种肝癌新标志物进行比较,为建立小肝癌诊断新技术奠定基础。方法:1.研究对象及其临床资料:研究对象为南昌大学第一附属医院2014-2015年间住院治疗的小肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者和健康体检的正常人。收集的血清标本,-80℃保存备用。同时收集研究对象的临床资料。2.肝癌血清适配子诊断小肝癌:采用本课题组前期建立的适配子荧光分析法检测血清标本。先以小样本小肝癌和肝硬化血清标本优化适配子及荧光染料用量,然后扩大样本检测小肝癌、肝硬化、慢性肝炎和正常血清标本。AUROC评价单项荧光指标、多项荧光指标Logistic回归建模、适配子联合分析对小肝癌的诊断价值,并计算诊断效率(敏感度、特异度、准确度、预测值和似然比)。3.肝癌血清新标志物诊断小肝癌:采用商业化ELISA试剂盒检测DKK1和MDK在小肝癌、肝硬化、慢性肝炎和正常血清标本中的表达水平,AUROC评价DKK1和MDK单独和联合分析对小肝癌的诊断价值。4.传统血清肿瘤标志物诊断小肝癌:收集研究对象的血清AFP、CEA、CA125和CA199检测结果,AUROC评价AFP及其与其他标志物Logistic回归建模对小肝癌的诊断价值,并计算诊断效率(敏感度、特异度、准确度、预测值和似然比)。5.适配子与常规实验室检查结果联合诊断小肝癌:将适配子、肿瘤标志物和肝功能通过logistic回归建模进行联合分析,auroc评价模型对小肝癌的诊断价值,并计算诊断效率(敏感度、特异度、准确度、预测值和似然比)。结果:1.研究对象的人口学资料及临床特点:本研究共收集研究对象432例,其中小肝癌102例(男83例,女19例,年龄55.9±12.4岁),肝硬化110例(男88例,女22例,年龄52.0±11.6岁),慢性肝炎110例(男86例,女24例,年龄36.8±12.6岁),正常对照110例(男77例,女33例,年龄55.5±6.2岁)。3组肝病患者的主要病因为乙肝病毒感染(69.1%~88.0%),肝功能child-pugh分级以a组为主(49.1%~54.9%)。2.肝癌血清适配子对小肝癌的诊断价值:适配子ap-hcs-9-74诊断小肝癌的单项指标最大auroc为0.748,多指标建模为0.819。ap-hcs-9-132诊断小肝癌的单项指标最大auroc为0.713,多指标建模为0.880。两者联合诊断小肝癌的auroc可提高到0.931,敏感度为90.2%,特异度为81.2%,准确度为83.3%。3.dkk1和mdk对小肝癌的诊断价值:dkk1在小肝癌和肝硬化血清标本(各32例)中的浓度分别为331.3±141.6pg/ml和339.5±71.0pg/ml(p=0.774)。mdk在小肝癌和肝硬化血清标本(各32例)中的浓度分别为1043.5±447.5pg/ml和967.6±942.8pg/ml(p=0.643)。dkk1诊断小肝癌的auroc为0.538,mdk诊断小肝癌的auroc为0.734,两者联合诊断小肝癌的auroc为0.540。4.afp等传统肿瘤标志物对小肝癌的诊断价值:afp单独诊断小肝癌的auroc为0.684,与cea、ca125和ca199联合建模诊断小肝癌的auroc为0.744。5.适配子与常规实验室检查结果联合对小肝癌的诊断价值:适配子、肿瘤标志物和肝功能联合建模诊断小肝癌的总auroc为0.965,敏感度为90.2%,特异度为90.3%,准确度为90.3%,阳性预测值为74.2%,阴性预测值为96.8%,阳性似然比为9.30,阴性似然比为0.11。结论:1.适配子AP-HCS-9-74和AP-HCS-9-132对小肝癌有良好的诊断价值,尤其是两者联合分析时。2.小样本分析未能证实DKK1和MDK的血清水平在小肝癌和肝硬化之间存在显著差异,单独或两者联合对小肝癌均无明显诊断价值。3.AFP对小肝癌的诊断价值有限,但与适配子联合分析可明显提高其诊断价值。
【关键词】：小肝癌 诊断 适配子 DKK1 MDK AFP 联合分析
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要3-6
• abstract6-13
• 第1章 引言13-16
• 1.1 小肝癌的诊断现状13-15
• 1.2 适配子及其在肿瘤诊断研究中的价值15-16
• 第2章 材料与方法16-25
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 实验试剂16
• 2.1.2 实验仪器16
• 2.1.3 主要溶液的配制16-17
• 2.2 实验方法17-24
• 2.2.1 血清标本收集与研究对象的诊断标准17
• 2.2.2 肝癌血清适配子检测小肝癌17-20
• 2.2.2.1 适配子荧光分析法检测小肝癌的实验条件优化17-19
• 2.2.2.2 适配子扩大样本检测小肝癌19
• 2.2.2.3 适配子联合分析检测小肝癌19-20
• 2.2.3 肝癌新标志物检测小肝癌20-23
• 2.2.3.1 血清DKK1水平的ELISA检测20-21
• 2.2.3.2 MDK检测小肝癌21-23
• 2.2.3.3 DKK1和MDK联合检测小肝癌23
• 2.2.4 AFP等传统肿瘤标志物检测小肝癌23
• 2.2.5 适配子与常规实验室检查结果联合检测小肝癌23-24
• 2.2.5.1 适配子与传统肿瘤标志物联合检测小肝癌23
• 2.2.5.2 适配子与肝功能联合检测小肝癌23-24
• 2.2.5.3 适配子与传统肿瘤标志物和肝功能联合检测小肝癌24
• 2.3 统计方法24-25
• 第3章 结果25-52
• 3.1 临床资料25-30
• 3.2 肝癌血清适配子对小肝癌的诊断价值30-41
• 3.2.1 适配子AP-HCS974对小肝癌的诊断价值30-35
• 3.2.1.1 适配子AP-HCS974检测小肝癌的最佳实验条件30-33
• 3.2.1.2 适配子AP-HCS974对小肝癌的诊断价值33-35
• 3.2.2 适配子AP-HCS9132对小肝癌的诊断价值35-40
• 3.2.2.1 适配子AP-HCS9132检测小肝癌的最佳实验条件35-38
• 3.2.2.2 适配子AP-HCS9132对小肝癌的诊断价值38-40
• 3.2.3 适配子联合分析对小肝癌的诊断价值40-41
• 3.3 肝癌新标志物对小肝癌的诊断价值41-43
• 3.3.1 DKK1对小肝癌的诊断价值41-42
• 3.3.2 MDK对小肝癌的诊断价值42-43
• 3.3.3 DKK1和MDK联合对小肝癌的诊断价值43
• 3.4 AFP等传统肿瘤标志物对小肝癌的诊断价值43-45
• 3.5 适配子与常规实验室检查结果联合对小肝癌的诊断价值45-52
• 3.5.1 适配子与传统肿瘤标志物联合诊断小肝癌45-47
• 3.5.2 适配子与肝功能联合诊断小肝癌47-49
• 3.5.3 适配子与肿瘤标志物、肝功能联合诊断小肝癌49-52
• 第4章 讨论52-56
• 4.1 适配子对小肝癌的诊断价值52-54
• 4.2 肝癌标志物对小肝癌的诊断价值54-56
• 第5章 结论与展望56-57
• 5.1 结论56
• 5.2 展望56-57
• 致谢57-58
• 参考文献58-61
• 攻读学位期间的研究成果61-62
• 综述62-72
• 参考文献69-72

【参考文献】

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1 童华波;庭永君;段Y，

本文编号：569871