siRNA敲减Annexin A1对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的生物学特性影响

发布时间：2017-07-28 19:01

  本文关键词：siRNA敲减Annexin A1对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的生物学特性影响

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【摘要】：目的：(1)用免疫组化方法,检测ANXA1 (Arinexin A1)蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达。(2)检测甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中ANX A1基因相关小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)转染效率,从基因水平检测当特异siRNA转入TPC-1细胞后的ANXA1基因表达情况。(3)分析ANX A1基因敲减后对TPC-1细胞凋亡、增殖、侵袭和转移的影响,探索ANX A1基因与TPC-1细胞的凋亡、增殖、侵袭和转移等关系。方法：(1)HE切片选取存档组织蜡块甲状腺乳头状癌69例,与之相对的癌旁组织69例,应用免疫组化方法检测ANX A1在甲状腺乳头状癌和癌旁组织中的表达情况。(2)使用siDirect Version2.0软件设计特异ANX A1基因小干扰(siRNA)3条片段,分别为ANXA1-siRNA1、ANX A1-siRNA2、ANX A1-siRNA3和negative-siRNA,用Lipfectamine2000将siRNA转染至TPC-1细胞内,计算转染效率后用RT-PCR检测TPC-1细胞中ANX A1基因敲减前后mRNA的表达变化,选出ANX A1基因敲减效果最好的siRNA。(3)当ANXA1基因敲减后,流式细胞术检测TPC-1细胞RNA干扰后72h凋亡情况；CCK-8试剂盒法检测TPC-1细胞RNA干扰后24h、48 h、72h及96h后细胞增殖情况；transwell小室迁移、侵袭实验检测TPC-1细胞RNA干扰后迁移和侵袭能力的影响。结果：(1)甲状腺乳头状癌组织ANX A1蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织(88.41%VS 9.8%),差异有统计学意义(P0.05)(2)转染后,采用荧光显微镜观察并记录siRNA转染情况,从而计算转染效率,经直接计算法(重复三次),转染效率达90%左右。(3)TPC-1细胞转染后,实验组ANXA1-siRNA1、ANXA1-siRNA2、 ANXA1-siRNA3与空白组、阴性对照组、脂质体组相比,3个特异性siRNA组的ANXA1基因mRNA表达水平下降,其中ANX-siRNA3下降最显著。(4)用ANX-siRNA3对ANXA1基因敲减后,TPC-1的凋亡较空白组、阴性对照组增加；细胞增殖能力较空白组、阴性对照组减弱；转移和侵袭能力较空白组和阴性对照组减弱。结论：本研究发现在人甲状腺乳头状癌组织中,ANXA1蛋白阳性率明显高于癌旁组织。在TPC-1细胞中,ANX A1基因敲减后,ANX A1表达下调。同时可诱导TPC-1细胞的凋亡、抑制细胞增殖、减弱细胞的侵袭和转移。提示ANX A1基因可能对TPC-1细胞的凋亡、增殖、侵袭和转移能力有一定的影响。以ANX A1为生物靶标,为甲状腺乳头状癌的诊断、治疗、以及预后提供了新思路。
【关键词】：甲状腺乳头状癌 ANX A1 免疫组化 siRNA TPC-1细胞 凋亡 增殖 侵袭 迁移
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R736.1
【目录】：

• 致谢3-5
• 摘要5-7
• abstract7-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-27
• 2 结果27-32
• 3 讨论32-38
• 4 结论38-39
• 附图39-44
• 参考文献44-48
• 综述：ANNEXIN Al与肿瘤48-60
• 参考文献56-60
• 附录60-61
• 个人简历61-62

【参考文献】

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1 阎海;;细胞凋亡研究进展[J];中山大学研究生学刊(自然科学.医学版);2012年03期

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本文编号：585506