黑色素瘤抗原蛋白D1促进口腔鳞癌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2017-07-29 21:01

  本文关键词：黑色素瘤抗原蛋白D1促进口腔鳞癌细胞凋亡的机制研究

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【摘要】：口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是最为常见的一种上皮源性恶性肿瘤,严重影响着人类的生命健康。近年来,对黑色素瘤抗原蛋白D1 (melanoma antigen D-1, MageD1)的研究越来越多,大量的数据表明其功能主要为调节细胞的凋亡,促进成骨发生及牙髓细胞的再生,并参与调节生理节律等,然而主要的研究对象是神经系统和少数肿瘤如乳腺腺癌,食道癌,肠癌等,MageD1在口腔鳞癌中的研究尚未有报道。因此,我们以口腔鳞状细胞癌为研究对象,观察了MageD1在口腔鳞状细胞癌中抑制细胞生长、促进凋亡等方面的生物学功能及其相关作用机制。研究目的：明确MageD1在口腔鳞状细胞癌中是否具有促进细胞凋亡等方面的生物学功能并初步探讨其相关作用机制。材料与方法：首先,我们收集了口腔鳞状细胞癌的临床组织,培养了口腔鳞状细胞癌细胞系,通过实时荧光定量PCR、免疫蛋白印记、免疫荧光和免疫组化的方法检测了MageD1在口腔鳞状细胞癌临床组织和细胞系中的表达情况；其次,我们选择一种口腔鳞癌细胞系作为研究对象,通过慢病毒转染,抗生素筛选的方法得到稳定的MageD1过表达细胞系,在此基础上,利用5-氟尿嘧啶(5-FU)构建细胞凋亡模型,并通过CCK8、流式细胞仪、免疫蛋白印记的方法检测了MageD1过表达后肿瘤细胞的凋亡、增殖、细胞周期等方面的变化。并在此基础上,我们利用MageD1过表达细胞系,通过裸鼠皮下成瘤、免疫组化、HE染色的方法检测了MageD1在动物体内的的促肿瘤细胞凋亡功能；最后,我们通过免疫蛋白印记、蛋白质免疫共沉淀的方法探究了NF-κB和p75NTR在MageD1介导的口腔鳞癌细胞凋亡中的具体机制。结果：首先,我们观察到MageD1在口腔鳞状细胞癌临床组织和细胞系中,无论在蛋白质水平还是mRNA水平,都呈异常低表达；其次,我们成功建立了稳定的MageDl过表达细胞系Lv-MageD1-HN6.结合CCK8实验,结果表明Lv-MageD1-HN6细胞的增殖能力弱于其对照组HN6细胞。5-FU处理后,Lv-MageD1-HN6细胞的凋亡明显高于对照组细胞,并且Lv-MageD1-HN6细胞表现出G2期阻滞,有丝分裂减少等细胞周期改变的现象。进一步的动物实验发现Lv-MageD1-HN6细胞形成的肿瘤和对照组细胞形成的相比,瘤体体积小而重量轻。免疫印迹的结果表明Lv-MageD1-HN6细胞中p75NTR的表达明显高于对照组细胞,并且MageD1的过表达改变了NF-kB在细胞核内外的表达量,而且MageD1能与NF-kB发生蛋白质免疫共沉淀,这可能与Lv-MageD1-HN6细胞中凋亡相关蛋白的表达上升有关。结论：1. MageD1在口腔鳞癌细胞系和临床标本中异常低表达,并且这种低表达与肿瘤恶性程度呈负相关。2. MageD1在口腔鳞癌细胞中具有促进细胞凋亡的作用,这种作用是通过与p75NTR相互作用这条经典信号通路产生的。同时,它能调节口腔鳞癌细胞周期变化,干扰了DNA的复制和有丝分裂的进程。这提示将MageD1作为肿瘤生物治疗的靶点具有现实的可行性。3. MageD1在口腔鳞癌细胞中具有调节NF-kB的作用,并且这种作用是通过两者蛋白间直接相互作用产生的。MageD1在口腔鳞癌中的促进细胞凋亡的作用是通过p75NTR实现的,并有可能通过NF-kB的信号通路实现。
【关键词】：黑色素瘤抗原蛋白D1 口腔鳞状细胞癌 细胞凋亡 NF-κB
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 第一部分：MageDl在口腔淲癌中的表达及临床意义12-28
• 1 材料与方法12-22
• 2 结果22-26
• 3 讨论26-27
• 4 结论27-28
• 第二部分 MageDl过表达对口腔淲癌细胞调亡及细胞周期的影响28-48
• 1 材料与方法28-37
• 2 结果37-45
• 3 讨论45-47
• 4 结论47-48
• 第三部分 NF-kB和P75NTR在MageDl介导的口腔淲癌细胞调亡中的相关机制48-56
• 1 材斜与方法48-51
• 2 结果51-54
• 3 讨论54-55
• 4 结论55-56
• 参考文献56-65
• 全文总结65-66
• 综述66-78
• 参考文献73-78
• 攻读学位期间发表文章情况78
• 攻读学位期间获奖情况78-79
• 致谢79

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本文编号：591048