DADS抑制SRC、ERK通路下调DJ-1对淋巴瘤细胞增殖侵袭的影响

发布时间：2017-08-01 14:39

  本文关键词：DADS抑制SRC、ERK通路下调DJ-1对淋巴瘤细胞增殖侵袭的影响

  更多相关文章： 二烯丙基二硫 DJ-1 OCI-LY1细胞 Raji细胞 Erk信号通路 Src信号通路

【摘要】：[目的]检测DJ-1蛋白在恶性淋巴瘤,淋巴结反应性增生及正常淋巴结组织中的表达,研究二烯丙基二硫(DADS)对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-LY1和Burkitt淋巴瘤细胞系Raji生物学行为,DJ-1表达及SRC,ERK信号通路的影响,为淋巴瘤的治疗提供新的思路。[方法]利用组织芯片结合免疫组化检测不同类型淋巴瘤,淋巴结反应性增生和正常淋巴结组织中DJ-1蛋白表达变化;用CCK-8法、流式细胞术、Giemsa染色法、Transwell迁移侵袭小室实验分别检测DADS对OCI-LY1细胞和Raji细胞增殖、细胞周期、分化及迁移侵袭能力等生物学行为的影响。Western blot法检测DADS处理后淋巴瘤OCI-LY1细胞和Raji细胞中DJ-1蛋白的表达,及Src,Erk信号通路的变化,联合Src抑制剂、Erk抑制剂对淋巴瘤OCI-LY1细胞和Raji细胞中DJ-1蛋白表达的影响。[结果]组织芯片结合免疫组化结果显示:霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤(包括弥漫性大B)细胞核DJ-1高表达率分别为42.9%、72.1%,高于非肿瘤组织(淋巴结反应性增生和正常淋巴结)14.3%(P0.05),细胞浆高表达率分别为100%、93.4%,高于非肿瘤组织(淋巴结反应性增生和正常淋巴结)28.6%(P0.05)。CCK-8法结果显示:OCI-LY1细胞经不同浓度(5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L)DADS作用24h、48h、72h后,增殖抑制作用呈时间-浓度依赖性增长。在Raji细胞中,经不同浓度(2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)DADS作用24h、48h、72h后,同样呈时间-浓度依赖性抑制细胞增殖。流式细胞术检测显示:OCI-LY1细胞和Raji细胞经DADS作用后,G1期百分率分别由47.72%、30.90%上升至54.43%、51.89%(P0.05),出现G1期阻滞。吉姆萨染色显示,DADS能诱导Raji细胞和OCI-LY1细胞向正常淋巴细胞方向分化。Western blot结果显示:DADS处理OCI-LY1细胞和Raji细胞12h、24h、48h后,DJ-1蛋白表达水平表现为时间依赖性的下降(P0.05)。经DADS处理OCI-LY1细胞和Raji细胞5min、15 min、30 min、60 min后,p-Src、p-Erk的蛋白表达水平较未处理的各组均下降(P0.05),且呈时间依赖性,Src、Erk总蛋白表达水平没有显著变化。Src抑制剂、Erk抑制剂以及二者分别联合DADS处理OCI-LY1细胞和Raji细胞12h、24h、48h后,DJ-1蛋白水平同样表现为时间依赖性的下降(P0.05),且联合处理组与Src抑制剂、Erk抑制剂单独处理组相比DJ-1蛋白水平下调更加明显。迁移侵袭实验显示:Src抑制剂、Erk抑制剂作能协同DADS抑制Raji细胞和OCI-LY1细胞的迁移和侵袭。[结论]1.DJ-1在多种类型淋巴瘤细胞核与细胞浆中均高表达。2.DADS可抑制淋巴瘤细胞Raji和OCI-LY1的增殖,抑制其迁移侵袭,其机制与抑制Src、Erk信号通路下调DJ-1表达有关。
【关键词】：二烯丙基二硫 DJ-1 OCI-LY1细胞 Raji细胞 Erk信号通路 Src信号通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要英文缩略语索引10-11
• 第1章 前言11-15
• 第2章 实验材料及方法15-23
• 2.1 材料15-17
• 2.2 实验方法17-23
• 第3章 实验结果23-47
• 3.1 组织芯片结合免疫组化检测DJ-1在淋巴瘤及非肿瘤性组织中的表达情况23-26
• 3.2 CCK-8 实验26-29
• 3.3 流式细胞术检测DADS对Raji细胞和OCI-LY1细胞周期影响29-30
• 3.4 Giemsa染色实验30-31
• 3.5 Western blot实验31-41
• 3.6 迁移实验41-42
• 3.7 侵袭实验42-47
• 第4章 讨论47-51
• 第5章 结论51-53
• 参考文献53-57
• 文献综述 Src蛋白酪氨酸激酶在慢性炎症介导肿瘤发生发展中的作用57-65
• 参考文献61-65
• 读硕期间撰写的论文65-66
• 本研究课题资助项目66-67
• 致谢67

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本文编号：604776