下调miRNA146a抑制胶质瘤微环境内M2型巨噬细胞分泌IL-6的研究

发布时间：2017-08-01 16:09

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【摘要】：目的:肿瘤微环境是目前研究的热点,其中肿瘤免疫炎性微环境在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。在胶质瘤中也是如此,胶质瘤免疫炎性微环境中的主要细胞是发挥固有免疫功能的巨噬细胞,除了传统的肿瘤抑制型M1型巨噬细胞,还有具有促进胶质瘤生长的M2型巨噬细胞。研究发现miRNA146a在M2型巨噬细胞明显高表达,而M2型巨噬细胞可分泌IL-6,IL-6不仅可以直接促进胶质瘤细胞的生长,也可刺激M1型巨噬细胞转变为M2型巨噬细胞从而间接达到促肿瘤生长效果。目前对于M2型巨噬细胞中miRNA146a与IL-6的关系鲜有报道。本实验拟建立M2型巨噬细胞模型,通过慢病毒转染下调M2型巨噬细胞中miRNA146a的表达,测定M2型巨噬细胞慢病毒干扰前后IL-6分泌的变化,以阐明miRNA146a在M2型巨噬细胞分泌IL-6中的作用。方法:正常培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞后,使用IL-4刺激RAW264.7,免疫组化检测刺激后的细胞的M2型巨噬细胞特性标记物CD206表达,以确定刺激后的细胞为M2型细胞。将M2型巨噬细胞分为三组,转染抑制性载体的实验组(PC)、转染空载体的阴性对照组(NC)与只加入完全培养基的空白对照组。对转染后的三组细胞行Real-time PCR检测miRNA146a的变化及IL-6表达的变化,GraphPad Prism5软件对实验数据进行统计学处理,所有数据以means±SD表示,进行t检验及其他相关统计学分析,P0.05具有统计学意义。结果:RAW264.7在IL-4刺激后,细胞表达CD206,极化为M2型巨噬细胞。使用慢病毒转染,转染抑制载体的PC组及转染空载体的NC组在荧光显微镜下均表达红色荧光示病毒已转染。Real-Time PCR结果表明转染抑制性载体病毒后M2型巨噬细胞中miRNA146a相对于NC组和空白对照组明显下降(P0.05)),NC组与空白对照组对比无明显变化(P0.05)。Real-Time PCR检测IL-6分泌情况,结果表明转染抑制性载体病毒后M2型巨噬细胞中IL-6mRNA相对于NC组和空白对照组明显下降(P0.05)。结果提示miRNA146a在M2型巨噬细胞中的下调可减少IL-6 mRNA的表达。结论:抑制miRNA146a在M2型巨噬细胞中的表达,可有效减少M2型巨噬细胞中IL-6mRNA的表达,理论上可有效抑制胶质瘤细胞生长,并可减少M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞的极化,为胶质瘤的微环境中提供有效的免疫细胞。
【关键词】：脑胶质瘤 miRNA146a M2型巨噬细胞 白细胞介素-6
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-11
• 材料与方法11-21
• 结果21-25
• 讨论25-27
• 总结27-28
• 参考文献28-29
• 综述29-44
• 参考文献37-44
• 缩略词表44-46
• 攻读学位期间公开发表的论文46-47
• 致谢47-48

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本文编号：605048