LY294002增强吡柔比星抗人骨肉瘤细胞恶性表型的体外研究

发布时间：2017-08-01 16:33

  本文关键词：LY294002增强吡柔比星抗人骨肉瘤细胞恶性表型的体外研究

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【摘要】：目的:本研究旨在体外研究吡柔比星(THP、PI)和LY294002(LY)联合使用对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的作用,为临床上骨肉瘤的治疗提供新思路。方法:①MTT法检测吡柔比星和LY294002单独和联合使用24小时对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞和MG63细胞增殖的影响。分别求出单药物和联合用药的IC50,用联合指数(CI)值公式来评价联合用药效率。②DAPI染色法检测一定浓度吡柔比星和LY294002单独和联合使用24小时对U2-OS、MG63细胞凋亡的影响。用金氏Q值公式来评价联合用药效率。③划痕和Transwell实验法检测一定浓度吡柔比星和LY294002单独和联合使用24小时对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞和MG63细胞迁移和侵袭的影响。结果:1、U2-OS和MG63接受单药和联合用药物刺激后细胞增殖均明显受到抑制,并呈剂量依赖性。其中U2-OS单独给药组,吡柔比星和LY294002的IC50分别为0.47±0.05μg/ml和19.71±1.87μg/ml,而联合用药组中,不同药物比例吡柔比星:LY294002=1:25、1:50、1:100的IC50分别为6.54±0.62、9.15±1.21、11.28±1.32ug/ml,相应的联合指数CI=0.74±0.05,0.81±0.07和0.87±0.06;MG63单独给药组,吡柔比星和LY294002的IC50分别为3.61±0.35ug/ml,17.36±2.07ug/ml,而联合用药组中,不同药物比例吡柔比星:LY294002=1:5、1:10、1:20分别对应的IC50分别为=5.56±0.65,5.04±0.55和5.36±0.62μg/ml,,相应的联合指数CI=0.54±0.08,0.37±0.06,0.39±0.07,所有CI值均小于0.95。2、MG63和U2-OS接受单药和联合用药物刺激后药物浓度的增加,凋亡细胞逐渐增多。MG63单独给药组,吡柔比星药物浓度为0.25、0.5、1μg/ml时,MG63的凋亡率分别为7.5±1.9%、14.5±3.2%、24±5.4%,LY294002药物浓度为5、10、20μg/ml时,MG63的凋亡率分别是10.5±2.1.%、8.9±3.5%、42.4±5.1%。联合用药时,吡柔比星+LY294002为0.25+5、1+5、1+20μg/ml,凋亡率分别为30.8±4.2%、39.5±5.4%、和74.5±8.9%,相应Q值分别为1.31±0.21、1.24±0.23和1.33±0.25;U2-OS联合用药组,吡柔比星+LY294002为0.1+5、0.2+5和0.2+20 ug/ml时,凋亡率分别为25.6±3.2%、33.5±4.5%和79.4±9.6%,相应Q值分别为1.5±0.28、1.23±0.25和1.49±0.32,所有Q值均大于1.15。3、MG63和U2-OS在对照组、吡柔比星组、LY294002组、联合给药组细胞迁移率分别为82±12%、35±7%、41±8%、12±3%和0.75±14%、33±8%、26±6%、10±3%,联合给药组迁移率明显高于单用药组(p0.05)。4、MG63和U2-OS在对照组、吡柔比星组、LY294002组、联合给药组中侵袭的细胞数分别为165±22、72±8、63±7、28±3和155±20、68±8、52±6、25±4,均显示联合给药组细胞的侵袭数量较单独给药组显著减少(p0.05)。结论:LY294002能明显增强吡柔比星抗骨肉瘤细胞恶性表型的影响,从而有效地抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞的凋亡。二者表现为协同作用,这将为后续的体内实验提供了一定的理论基础,也为临床骨肉瘤的新的化疗方案提供了新的参考。
【关键词】：骨肉瘤 转移 LY294002 吡柔比星 协同作用
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词表10-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 材料与方法13-22
• 2.1 实验材料、试剂和仪器13-14
• 2.1.1 细胞13
• 2.1.2 主要药物13
• 2.1.3 主要试剂13-14
• 2.2 主要软件14
• 2.3 主要仪器14-15
• 2.4 主要试剂的配制15-16
• 2.4.1 细胞培养主要试剂的配制15
• 2.4.2 LY294002 的溶解吡柔比星的配制15-16
• 2.4.3 MTT溶液的配制16
• 2.4.4 4%多聚甲醛的配制16
• 2.5 实验方法16-21
• 2.5.1 细胞复苏、传代、冻存16-17
• 2.5.2 MTT法测骨肉瘤细胞增殖17-18
• 2.5.3 DAPI染色法检测骨肉瘤细胞凋亡18-19
• 2.5.4 划痕愈合实验检测细胞迁移19-20
• 2.5.5 Transwell侵袭实验检测细胞侵袭性20-21
• 2.6 统计方法21-22
• 第3章 结果22-29
• 3.1 LY294002 协同吡柔比星对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用22-24
• 3.2 LY294002 显著增强吡柔比星促进骨肉瘤细胞凋亡的作用24-26
• 3.3 LY294002、吡柔比星单独给药和联合给药对U2OS、MG63 细胞迁移能力的影响26-29
• 第4章 讨论29-32
• 第5章 结论与展望32-33
• 致谢33-34
• 参考文献34-38
• 综述38-45
• 参考文献42-45

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本文编号：605185