载洛铂MWNTs-PEG的制备及其对肝癌细胞HepG2作用的初步研究

发布时间：2017-08-03 13:27

  本文关键词：载洛铂MWNTs-PEG的制备及其对肝癌细胞HepG2作用的初步研究

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【摘要】：目的:构建载药功能化多壁碳纳米管的靶向递药系统,研究其对Hep G2肝癌细胞的穿透性及细胞增殖的抑制作用。方法:1.以多壁碳纳米管为原料,经过表面氧化、酰基化使其修饰、改性,再通过酯化反应接枝聚乙二醇,得到功能化的多壁碳纳米管(MWNTs-PEG),并进行表征其形貌和测定其粒径等理化性质。2.利用π-π键吸附,用绿色荧光物质FITC标记MWNTs-PEG,通过公式计算载药量,采用荧光分光光度法检测其溶液中的荧光强度,根据荧光强度变化计算复合物中FITC的泄露程度。3.洛铂(LBP)是一种常用抗肿瘤药物,将洛铂的前体铂(IV)复合物通过π-π键连接到胺基化的MWNTs-PEG,制备LBP-MWNTs-PEG复合物,并检测其在体外释放情况并绘制体外释放曲线。4.体外培养Hep G2肝癌细胞,激光共聚焦显微镜检测Hep G2肝癌细胞对FITC标记的MWNTs-PEG的摄取情况,并检测FITC在细胞内的平均荧光强度值。5.将LBP-MWNTs-PEG加入细胞培养基,以LBP为对照,分别对Hep G2肝癌细胞进行干预24、48、72h后,采用MTT法检测对Hep G2肝癌细胞增殖的抑制作用,并比较在不同时间的抑制效果。结果:1.透射电镜下观察,MWNTs在反应前后未发生明显的改变,且管壁形态结构清楚,表明反应后MWNTs结构本身没有被破坏。水溶性外观呈均匀分散状态,溶液呈淡灰色。水化粒径约为175nm,在2周内未见明显的粒径变化。2.通过计算FITC的载药量为43.2%。FITC-MWNTs-PEG泄露试验显示,在PH为7.4的PBS中,36h内复合物的泄露率不超过2.0%。3.通过计算LBP的载药量为72%。体外释放试验显示,在PH为5.0的PBS中12d内释放可超过90%,在PH9.0的PBS中,释放量不超过10%。表明LBP-MWNTs-PEG对酸敏感,在酸性环境中更易释放,在中性环境中具有缓释的效果,在碱性环境中比较稳定且不容易释放。4.激光共聚焦显微镜下可观察到绿色和蓝色荧光两种颜色重叠,证实了MWNTs-PEG可以进入细胞。平均荧光强度值为743.41±121.36。5.MTT结果显示,在复合物作用于细胞24h后,游离LBP对Hep G2肝癌细胞增殖的抑制作用高于LBP-MWNTs-PEG;随着时间的增加,LBP-MWNTs-PEG的细胞增殖的抑制作用逐渐增加,在药物作用48h,药物浓度约50ug/ml时,LBP-MWNTs-PEG对细胞增殖的抑制作用已经高于游离LBP;72h时,游离LBP对细胞增殖的抑制作用较48h变化不明显,然而LBP-MWNTs-CNT对细胞增殖的抑制作用进一步增加。结论:1.经PEG修饰的多壁碳纳米管具有良好的水溶性及稳定性,在MWNTs-PEG的基础上制备了FITC-MWNTs-PEG标记探针,并且结合了抗肿瘤药物洛铂,成功构建LBP-MWNTs-PEG载药模型。进一步测定证明了用此种方法制备的复合物具有稳定性及PH靶向性。2.细胞摄取实验显示FITC标记的MWNTs-PEG可以进入细胞,证明其具有良好的细胞穿透性。3.LBP-MWNTs-PEG对Hep G2肝癌细胞增殖的抑制作用,表明其具有缓释作用,具备一定的靶向性。
【关键词】：多壁碳纳米管 洛铂 Hep G2细胞 穿透性 靶向性
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用缩写词中英文对照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分PEG修饰多壁碳纳米管靶向递药系统模型的构建14-25
• 1 PEG修饰多壁碳纳米管的制备和表征14-18
• 1.1 实验目的14
• 1.2 实验材料及仪器14
• 1.3 实验方法14-15
• 1.4 结果15-17
• 1.5 小结17-18
• 2 FITC标记MWNTs-PEG的制备18-21
• 2.1 实验目的18
• 2.2 实验材料及仪器18
• 2.3 实验方法18-19
• 2.4 结果19-20
• 2.5 小结20-21
• 3 载洛铂MWNTs-PEG的制备和表征21-25
• 3.1 实验目的21
• 3.2 实验材料及仪器21
• 3.3 实验方法21-22
• 3.4 结果22-23
• 3.5 小结23-25
• 第二部分 制备的复合物对Hep G2肝癌细胞的体外研究25-35
• 1 主要实验材料与试剂25-27
• 1.1 主要仪器25
• 1.2 主要试剂及耗材25-27
• 2 实验方法27-31
• 2.1 主要工作液配制27
• 2.2 细胞培养27-28
• 2.3 细胞对FITC-MWNTs-PEG穿透性实验28-29
• 2.4 MTT法检测LBP-MWNTs-PEG对Hep G2细胞增殖的抑制作用29-30
• 2.5 统计学处理30-31
• 3 实验结果31-35
• 3.1 细胞的培养31
• 3.2 细胞对FITC-MWNTs-PEG穿透性实验31-32
• 3.3 MTT法检测LBP-MWNTs-PEG对Hep G2细胞增殖的抑制作用32-35
• 讨论35-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-53
• 参考文献49-53
• 致谢53-54
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果54-55
• 个人简历55

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1 李强;载洛铂MWNTs-PEG的制备及其对肝癌细胞HepG2作用的初步研究[D];山西医科大学;2015年

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本文编号：614611