MPDZ基因在肺癌中的甲基化和表达分析

发布时间：2017-08-03 15:09

  本文关键词：MPDZ基因在肺癌中的甲基化和表达分析

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【摘要】：背景:肺癌是最常见的严重威胁人类健康的恶性肿瘤,在全世界范围内肺癌也是主要的死亡原因之一。由于大部分肺癌病人确诊时已为肿瘤中晚期,因此肺癌的5年存活率仍然不足15%。越来越多的研究表明,DNA甲基化在肿瘤抑制基因的转录沉默调控中具有重要作用。抑癌基因启动子区域DNA甲基化改变与肺癌的发生密切相关。因此,通过寻找肺癌发生过程中DNA甲基化的变化规律,将为其早期诊断和改进治疗方式提供新的思路。MPDZ基因是我们前期在肺癌组织中新筛选出的一个甲基化基因,但是其在肺癌以及其他肿瘤中的甲基化及其功能还不清楚,因此本课题拟通过对MPDZ基因在肺癌组织、癌旁正常组织以及肿瘤细胞株中的甲基化、表达分析,初步评价其在肺癌发生中的意义,为后续深入研究该基因在肿瘤发生中的作用及机制提供资料。目的:1.分析MPDZ基因在肺癌细胞、癌旁组织和肺癌组织及相应血浆和痰液中的甲基化发生情况以及甲基化发生率与患者临床病理资料的关系;2.分析MPDZ基因在肺癌细胞和肺癌组织中的表达与其甲基化调控之间的关系;3.分析MPDZ基因在肺癌组织的蛋白表达与临床病理学、患者生存时间的关系。方法:1.采用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)和亚硫酸氢盐修饰测序PCR(Bisulfite sequencing PCR,BSP)相结合的方法检测肺癌细胞、癌旁组织和肺癌组织及相应血浆和痰液中MPDZ基因的甲基化情况;2.采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色的方法检测肺癌细胞、肺癌组织和癌旁组织中MPDZ基因表达情况以及去甲基化药物5-aza-2′-deoxycytidine(5-aza-d C)处理前后肺癌细胞中MPDZ基因的表达变化情况;3.采用SPSS17.0统计软件,通过卡方检验分析MPDZ基因的甲基化或表达与患者临床病理资料之间的相关性,通过Kaplan-Meier和Cox-regression生存分析方法分析mpdz表达与患者生存时间之间的关联。结果:1.mpdz基因在70%(7/10)的肺癌细胞株、61.2%(60/98)的肺癌组织、55.6%(70/126)的肺癌患者血浆标本和48.1%(50/104)的肺癌患者痰液标本中发生了高甲基化,而在正常肺上皮细胞株hbe和20例癌旁正常组织中均没有发生甲基化;经统计学分析,肺癌细胞和正常细胞以及肺癌组织和癌旁组织间甲基化差异具有显著统计学意义(p0.01)。2.mpdz基因在62例具有对应的血浆和痰液标本的肺癌组织中43例都检测出甲基化,甲基化发生率达到69.4%(43/62),在43例发生了甲基化的肺癌组织相对应血浆标本中有33例发生了甲基化,甲基化率为76.7%(33/43);在43例发生了甲基化的肺癌组织相对应的痰液标本中有20例发生了甲基化,甲基化率为46.5%(20/43)。提示血浆与痰液标本中mpdz基因甲基化有较高的检出率,是一个候选的诊断标志物。3.mpdz基因的甲基化发生率与肺癌患者的临床分期明显相关(p=0.047),而与患者的年龄(p=0.156)、性别(p=0.950)、是否吸烟(p=0.455)、肿瘤的分化程度(p=0.445)以及肿瘤病理类型(p=0.100)不相关,且mpdz基因甲基化发生率在iii+iv期(15/17,88.2%)患者显著高于i+ii期(28/45,62.2%)患者。4.mpdz蛋白在大部分高甲基化的肺癌细胞和大部分的肺癌组织中呈现低表达或不表达,与该基因在这些细胞和肺癌组织中的高甲基化密切相关,而且肺癌细胞进行去甲基化药物5-aza-dc处理后mpdz基因的表达明显得到恢复。这些结果表明,mpdz基因在肺癌中是一个受dna甲基化调控的基因。5.mpdz蛋白表达与肺癌患者的病理分级(χ2=7.250,p=0.027)和临床分期(χ2=5.773,p=0.016)密切关联,而与肺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结总数、淋巴结状态和病理分型不相关(p0.05)。6.mpdz蛋白表达与总肺癌(p0.001)、肺腺癌(p0.001)和肺鳞癌(p=0.001)患者的生存期长短均呈正相关,且该蛋白表达是一个独立的预后因素。mpdz蛋白在临床tnm分期i+ii期患者及iii+iv期患者中的预后意义存在明显差异,在i+ii期患者mpdz蛋白表达与患者生存时间正相关,是一个独立的预后因素,而在iii+iv期患者mpdz蛋白表达与患者生存时间不相关。结论:MPDZ基因在肺癌中是一个受DNA甲基化调控的基因,其在肺癌组织中甲基化发生率与肺癌患者的临床分期明显相关,其表达与肺癌患者的病理分级和临床分期密切关联,最重要的是MPDZ蛋白表达与肺癌患者的生存期长短均呈正相关,且该基因的蛋白表达是一个独立的预后因素。这些结果提示,MPDZ基因在肺癌的发生过程中可能起着重要作用,且其甲基化或表达可以作为肺癌诊断和预后判定的一个潜在的标志物。
【关键词】：MPDZ 肺癌 DNA甲基化 基因表达 生存分析 预后因素
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 英文缩略词4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 MPDZ基因在肺癌组织及相应癌旁组织、外周血浆、痰液和肺癌细胞株中的甲基化状态分析13-28
• 2.1 材料和方法13-20
• 2.2 实验结果20-26
• 2.3 讨论26-28
• 第三章 MPDZ基因在肺癌中的表达及甲基化对表达的调控分析28-43
• 3.1 材料和方法28-31
• 3.2 实验结果31-40
• 3.3 讨论40-43
• 全文总结43-44
• 参考文献44-48
• 文献综述 DNA甲基化与肺癌研究进展48-58
• 参考文献52-58
• 学位期间发表论文58-59
• 致谢59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 ;Methylation profile of the promoter CpG islands of 14 “drug-resistance”genes in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年23期

2 沈洪兵,俞顺章;我国肺癌流行现状及其预防对策[J];中国肿瘤;2004年05期

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本文编号：614952