YAP与P-YAP在肝细胞癌中的表达与其临床生物学行为关系的研究

发布时间：2017-08-04 01:10

  本文关键词：YAP与P-YAP在肝细胞癌中的表达与其临床生物学行为关系的研究

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【摘要】：目的:肝细胞癌(HCC,hepatocellular carcinoma)是肝脏原发肿瘤中最常见的类型,也是我国乃至全世界.最常见的恶性肿瘤疾病之一。通常HCC被发现时患者已进入晚期,常规化疗对其作用不明显,致使生存率较其它癌症显著降低。因此,加强对HCC的发病机制研究,寻找更多关于肝癌基因及抑癌基因的表达并明确其与HCC的关系已成为当前研究的重要方向。Hippo通路在促进细胞凋亡,限制细胞增殖,调控器官分化方面起着重要的作用。YAP(Yes-associated protein)即Yes相关蛋白,作为该通路下游的效应因子,多以磷酸化形式(P-YAP)参与细胞信号转导以调控细胞凋亡与增殖的平衡。在病理状态下,被阻断或失活的Hippo通路对YAP磷酸化作用失效致YAP自身活性增强使细胞增生和凋亡间平衡失调、组织器官过度生长及肿瘤发生。国内外相关研究表明,YAP作为新近发现的癌基因,参与胃癌、结肠癌、肺癌等多种肿瘤的形成和发展。但YAP、P-YAP在肝细胞肝癌组织中的表达情况及意义报道还不多见。本课题以原发肝细胞肝癌患者为研究对象,应用常规病理免疫组化技术、蛋白印迹(Western blot)技术检测YAP,P-YAP在肝细胞癌组织、癌旁肝硬化组织及正常肝组织中的表达情况,从基础与临床相结合角度分析其表达意义,研究了YAP表达与患者年龄、肿瘤大小、AFP水平、病理分级、血管侵犯情况及TNM分期的关系,进而推测YAP在肝细胞肝癌发生发展中的重要功能及意义,为肝癌的发生和诊治提供一定依据。方法:收集唐山市工人医院肝胆外科2012年8月至2014年7月间具有完整临床及病理资料的78例肝细胞肝癌根治性切除术的标本。所取标本一式两份,一份用中性福尔马林固定置备石蜡切块供HE染色和免疫组化使用,一份留取新鲜组织供Western blot备检。HE染色,镜下观察三种组织标本的病理变化;应用免疫组织化学染色SP法检测YAP、P-YAP在三种组织中的表达情况;从冷冻组织中提取蛋白,用Western blot方法检测各组标本中YAP、P-YAP蛋白的表达情况;卡方检验分析YAP与HCC患者年龄、肿瘤大小、病理分级、转移情况及TNM分期的关系;Pearson相关分析对各组中YAP、P-YAP蛋白的表达关系进行相关分析。结果:1 HE染色正常肝组织内肝小叶结构清晰,肝细胞排列紧密有序呈索状,可见中央静脉及多处毛细血管窦;肝硬化组织中肝小叶正常结构被破坏,肝细胞排列紊乱且体积增大,细胞核大且深染,纤维组织增多,可见较多炎性细胞;肝癌组织失去正常肝小叶结构,癌细胞体积增大,异形性明显,大小形态极不一致,胞核明显变大、嗜碱性增强,可见多核及异型核,毛细血管窦扩张。2免疫组织化学法染色结果显示正常肝组织的细胞质中P-YAP表达强阳性,肝硬化组织胞质内弱阳性表达,而肝癌组织中几乎无表达;而与P-YAP相反,YAP在肝癌组织的细胞核及胞浆中呈深棕黄色的强阳性表达,在肝硬化组织胞核及胞浆中棕黄色阳性表达,正常肝组织内无细胞核表达。3 Western blot法检测结果显示正常肝组织内P-YAP蛋白的表达明显高于肝癌组织,差异具有统计学意义;而伴随着正常组织到肝癌的演变,YAP蛋白表达依次升高,在肝癌组织中的表达显著高于肝硬化和正常肝组织,差异具有统计学意义。4癌组织内YAP的表达与AFP水平、病理分级、血管侵犯情况及TNM分期相关,与患者年龄及肿瘤大小无明显相关性。5 P-YAP蛋白表达量随YAP蛋白表达量的增高而下降,两者呈负相关。结论:1 YAP在HCC患者中强阳性表达,且与AFP水平、病理分级、血管侵犯情况及TNM分期相关,与患者年龄及肿瘤大小无明显相关性,提示其可能在肝细胞癌的发生、发展起重要的作用;2肝硬化组织和肝癌组织中P-YAP蛋白表达量随YAP蛋白表达量的增高而下降,两者呈负相关。3 P-YAP在正常肝细胞胞浆内表达,去磷酸化后YAP在HCC患者胞核内表达,可能提示了病理状态下,YAP磷酸化失效,致使去磷酸化的YAP由细胞浆进入细胞核中且转录活性表达增强,发挥自身癌基因作用促进了HCC的发生。
【关键词】：肝细胞癌 肝硬化 正常肝组织 Yes相关蛋白 磷酸化Yes相关蛋白
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-21
• 结果21-24
• 附图24-30
• 附表30-33
• 讨论33-36
• 结论36-37
• 参考文献37-40
• 综述YAP与恶性肿瘤的研究现状与进展40-49
• 参考文献45-49
• 致谢49-51
• 个人简历51-52

【参考文献】

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本文编号：617105