FoxM1基因在人类Burkitt淋巴瘤细胞株Raji中的功能研究

发布时间：2017-08-06 09:08

  本文关键词：FoxM1基因在人类Burkitt淋巴瘤细胞株Raji中的功能研究

  更多相关文章： FoxM1 Burkitt淋巴瘤 Raji Thiostrepton(TST) TST 多柔比星 FoxM1 药物敏感性

【摘要】：目的：FoxM1属于Forkhead Box转录因子家族,参与调节正常细胞增殖和凋亡等多种重要病理生理过程,其在多种实体肿瘤存在异常高表达。近年来FoxM1在血液系统肿瘤中的作用被日渐关注,本文旨在研究FoxM1基因在人类Burkitt淋巴瘤细胞株Raji中的表达水平,探索其在B细胞淋巴瘤(B-NHL)疾病增殖和凋亡中的作用。方法：采用实时定量PCR (qRT-PCR)方法检测正常人外周血CD19+的B淋巴细胞(正常对照,NC)和Raji细胞的mRNA水平,蛋白质印记法(Western-blot)检测蛋白水平的表达。硫链丝菌素(TST)是FoxM1的特异性抑制剂,是一种具有抗生素性质的天然产物,用TST处理Raji细胞后,通过细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)进行加入不同药物浓度TST后的细胞活性抑制率检测,24及36 h后加入CCK8 20 μl,测得各孔OD值,计算出TST对Raji细胞24 h及36h的半抑制浓度(IC50)；再用此浓度处理Raji细胞后,采用流式细胞术(FCM) Annexin/PI双染法检测用TST处理及未处理NC的凋亡率,同时在mRNA及蛋白水平验证FoxM1的表达变化。结果：FoxM1在mRNA和蛋白水平的表达都显著高于正常对照(p0.05和p0.001),使用特异性抑制剂TST后明显抑制Raji细胞增殖并且凋亡率显著增加,进一步分析发现TST对Raji的作用呈剂量及时间依赖性,随着剂量及时间的增加凋亡率呈现上升趋势,测得24 h的半抑制浓度为5.39 pmol/L,同时在mRNA及蛋白水平检测FoxM1具有统计学差异,即FoxM1显著下调(p0.001和p0.05)。结论：FoxM1在人类Burkitt淋巴瘤细胞株Raji中呈现mRNA和蛋白水平高表达,特异性抑制FoxM1表达可以抑制Raji增殖并促进凋亡,表明FoxM1在Raji细胞增殖和凋亡中发挥重要作用。目的：研究FoxMl特异性抑制剂thiostrepton (TST)在增加Raji细胞株对多柔比星药物敏感性中的作用。方法：利用CCK8和流式细胞术分别检测TST和多柔比星对于Raji细胞株增殖和凋亡的影响,摸索两种药物作用的浓度梯度,进一步利用两者低浓度联合处理Raji细胞株,观察是否存在协同效应。结果：经过分析发现TST和多柔比星对于Raji细胞株增殖和凋亡的影响都呈现时间和剂量依赖性。TST对Raji细胞作用的IC50为5.39μmol/L,当浓度为3μmol/L时细胞抑制率及凋亡率降低,Raji细胞平均凋亡率为10.82%；单用多柔比星0.08 μmol/L和0.03 μmol/L作用Raji细胞24 h后凋亡率分别为23.52%和9.32%,故认为低浓度的TST (3 μmol/L)和多柔比星(0.03 μmol/L)细胞毒性较弱；首先联用3 μmol/L的TST后多柔比星的IC50值从0.08 μmol/L降至0.04μmol/L;进一步联合低浓度TST和多柔比星作用Raji细胞株24 h后的平均凋亡率为21.41%,凋亡率较两者单药显著增加(p0.05)。结论：FoxM1特异性抑制剂TST和多柔比星均可以抑制Raji细胞增殖和促进凋亡,并且呈现时间和剂量依赖性,两者在较低浓度联合使用可以产生协同效应,显著提高Raji细胞株对多柔比星的敏感性,促进细胞凋亡。
【关键词】：FoxM1 Burkitt淋巴瘤 Raji Thiostrepton(TST) TST 多柔比星 FoxM1 药物敏感性
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733
【目录】：

• 第一部分 FoxM1基因对Raji细胞株增殖和凋亡的作用5-37
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 材料与方法13-24
• 结果24-30
• 分析与讨论30-33
• 参考文献33-37
• 第二部分 FoxM1在Raji细胞株药物增敏中的作用研究37-53
• 中文摘要37-38
• Abstract38-40
• 前言40-42
• 材料与方法42-44
• 结果44-48
• 分析与讨论48-51
• 参考文献51-53
• 综述53-64
• 参考文献60-64
• 附录64-66
• 致谢66

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本文编号：629203