胶质瘤中MGMT、k-ras的表达及意义

发布时间：2017-08-06 21:12

  本文关键词：胶质瘤中MGMT、k-ras的表达及意义

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【摘要】：目的:脑胶质瘤是人类中枢神经系统中最多见的原发恶性肿瘤,每年发病率大约为5/10万。我国属于脑胶质瘤病的高发地区,每年的新发病人数与因胶质瘤病而死亡的人数呈逐年上升态势,并且脑胶质瘤具有生长侵袭性、极易复发和无法根治等特点,已经成为了令全球专家棘手的难题。脑胶质瘤的形成是一个多种基因参与、多个阶段发展的过程,是环境与遗传等因素共同作用的结果,一方面机体受到来源于环境当中的危险因素导致DNA损伤促使原癌基因激活和/或抑癌基因失活。另一方面因为基因个体的差异,在少量的危险因素刺激下即可使携带易感基因型的个体发病。环境中的有害因素对人体细胞DNA产生损害,致其发生突变,但我们的机体有相应的自我修复机制,6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNAmethyltransferase MGMT)就是普遍存在人体细胞当中的DNA修复酶,其能够修复DNA上烷化剂等有害因素对鸟嘌呤O(6)位点产生的损害,使DNA恢复其原有的结构和功能。k-ras属于ras基因家族一员,是细胞当中的原癌基因,k-ras蛋白在细胞内生长信号传递中起重要作用,是调控细胞分裂增殖的关键因素。当k-ras基因的结构或调控区发生变异时,机体细胞的分裂增殖就会发生了异常。k-ras基因的突变是“启动”癌变的关键要素之一。通过研究MGMT与k-ras在脑胶质瘤细胞中的表达及二者与胶质瘤级别高低的关系,可以为实现脑胶质瘤病的及早预防、及时诊断、妥善治疗、延长患者生存期等开辟一条新途径。本次研究课题通过检测MGMT、k-ras在正常脑组织、低级别和高级别脑胶质瘤中的表达以探讨二者在脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法:自2014年12月至2015年6月,在河北医大二院手术室,收集神经外科手术当中的切下的胶质瘤标本。胶质瘤组织切下后,立即选取适当部位切取标本,留取进行免疫组化的组织放入10%福尔马林固定,常温储存;留取进行PCR的组织,置入冻存管内,并及时将管放入液氮罐内储存,共收集50例胶质瘤患者手术标本。经核实,收集标本的胶质瘤患者术前都没有进行放化疗等抗肿瘤治疗。将50例标本按照WHO 2007版关于中枢神经系统肿瘤的分类,26例为Ⅰ~Ⅱ级属于低级别胶质瘤;24例为Ⅲ~Ⅳ级属于高级别胶质瘤,这50例标本都有本院病理科出具的病理报告。另外在脑出血或脑外伤手术当中,收集12例正常脑组织标本做为对照组,收集方法同收集胶质瘤组织一样。分别应用免疫组织化学法和RT-PCR,检测正常脑组织和胶质瘤组织中MGMT、k-ras的表达情况。应用SPSS19.0统计学软件中非参数检验方法对所得数据进行分析。结果:1 IHC结果显示:在正常脑组织与低、高级别胶质瘤组中,MGMT表达阳性率依次为:92%、81%、71%;k-ras表达阳性率依次为:33%、81%、96%。对MGMT与k-ras所得实验数据进行统计分析,结果显示:在三组之间进行比较,显示有显著性统计学差异(P=0.000),并且在其中任意两组之间比较显示有显著性统计学差异(P0.05),差异有统计学意义。这样从上述结果中可看出,随着胶质瘤级别的升高,MGMT表达量逐渐减少,而k-ras表达量逐渐升高。经相关性分析计算,MGMT与k-ras在三组中表达呈明显负相关(r=-0.399,P=0.001),在低级别胶质瘤与正常脑组织组表达也呈负相关(r=-0.384,P=0.017),在高级别胶质瘤与正常脑组织组表达同样呈负相关(r=-0.454,P=0.005),但是在高、低级别胶质瘤组间,表达未见相关关系,这可能与样本量少有关。2 RT-PCR结果显示:根据MGMT与k-ras的PCR表达的数据计算,随胶质瘤级别升高,MGMT的中位数逐渐降低,而k-ras的中位数逐渐升高。另外统计学分析后,在三组之间进行比较,显示有显著性统计学差异(P=0.000),并且在其中任意两组之间比较显示有显著性统计学差异(P0.05)。这就可证明,随着肿瘤级别增高,MGMT表达量逐渐减少,而k-ras表达量逐渐升高,这个结论同免疫组化结果相吻合。经相关性分析计算,MGMT与k-ras在三组中表达呈负相关(r=-0.539,P=0.001),在低级别胶质瘤与正常脑组织组表达也呈负相关(r=-0.375,P=0.020),在高级别胶质瘤与正常脑组织组表达同样呈负相关(r=-0.531,P=0.001),但是在高、低级别胶质瘤组间,表达未见相关关系,这可能与样本量少有关。结论:1 MGMT在三组之间及两两组间比较,表达都有显著性统计学差异。这证明MGMT表达量减少与胶质瘤的发生、发展是相关的,这与MGMT对胶质细胞DNA损伤起保护作用,防止基因突变有关,MGMT可防止胶质细胞肿瘤样变的发生。2 k-ras在三组之间及两两组间比较,表达都有显著性统计学差异。这证明k-ras表达量增多与胶质瘤的发生、发展是相关的。这与k-ras蛋白传递细胞分裂信号有关,k-ras基因突变程度越高,胶质瘤的恶性程度越高。3 MGMT和k-ras在胶质瘤中地表达存在相互关联性,MGMT表达降低,k-ras表达升高。作为修复基因的MGMT可以修复k-ras当中的损伤,防止胶质细胞肿瘤样变的发生。4本次实验通过对MGMT和k-ras的研究,可以为胶质瘤的诊断及靶向治疗提供一个方向。
【关键词】：胶质瘤 MGMT k-ras 免疫组化 RT-PCR
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-21
• 结果21-23
• 附图23-30
• 附表30-32
• 讨论32-37
• 结论37-38
• 参考文献38-40
• 综述 MGMT、ras基因与肿瘤关系及研究进展40-54
• 参考文献50-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

【参考文献】

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1 林英,黄世章,郝卓芳,廖德贵;MGMT及P53在脑胶质瘤组织中的表达及其生物学意义[J];现代临床医学生物工程学杂志;2005年03期

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本文编号：631456