Per2节律基因对A549肺癌细胞侵袭迁移能力的影响及其相关分子的实验研究

发布时间：2017-08-07 06:04

  本文关键词：Per2节律基因对A549肺癌细胞侵袭迁移能力的影响及其相关分子的实验研究

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【摘要】：研究背景肺癌是当今世界发病率和病死率增长最快,对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。转移是肺癌的恶性标志和特征,也是导致治疗失败和患者死亡的首要原因,约有30%的肺癌患者在首诊时已有远处转移,另有50%-60%在治疗过程中发生远处转移,80%-90%的肺癌死亡是由转移引起。而近年来时间生物学(Chronobiology)在肺癌研究领域的运用为我们揭示肺癌转移的分子机制这一难题开辟新思路。生物钟基因不仅参与调控正常细胞的各种生物学行为,同样也影响着肿瘤细胞的多种生物学行为,可能是一种肿瘤抑制基因。近年来生物钟基因特别是Period基因已成为国内外肺癌研究领域内的一个新焦点[3-5]。研究提示Period基因参与了肺癌的发生、发展及细胞凋亡等多种生物学行为。目前已知可能抑制肺癌转移的基因有CDH1,Nm23,KAI1和MTS1等。可能起促进肺癌转移作用的基因有c-Myc,VEGF和CD44。但对于Period基因是否参与了对肺癌侵袭转移能力的调控,国内外目前还没有相关研究。目的探寻Per2基因在人肺癌中侵袭转移方面的作用和意义。方法体外实验构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Per2,慢病毒包装,并采用慢病毒转染人A549肺癌细胞,构建稳定转染的A549细胞株,RT-PCR和Western Blotting法鉴定过表达Per2基因表达。改良Boyden小室法和划痕实验法检测稳定转染细胞体外侵袭迁移能力的变化。RT-PCR和Western Blotting法检测NM23、VEGF、C-MYC、CDH1和CD44基因和蛋白的表达水平。体内实验：运用免疫组化技术检测皮下移植瘤中Per2,Nm23和CDH1的表达水平。通过裸鼠尾静脉注射稳定转染A549细胞,构建裸鼠A549肺癌细胞侵袭迁移模型,解剖两组裸鼠的脑、肺、肝和肾上腺组织,进行HE染色,进行统计分析。结果体外实验：RT-PCR实验结果证实OE(over-expressed)组比NC(negative control)组Per2基因表达量高出11倍。Western blotting结果也显示OE组较NC组Per2基因表达量明显提高,并通过灰度定量分析,两组之间差异有统计学意义(P=0.0425)。体外侵袭和迁移实验结果表明NC组细胞穿透小室的平均细胞数为134.2±7.165和130.8±9.987。OE组细胞穿透小室的平均细胞数为56.80±6.763和20.20±4.164,NC组明显高于OE组(P0.0001和P0.0001)。 划痕实验NC基因组细胞平均迁移距离为452.8±5.279像素,OE细胞平均迁移距离315.4±5.743像素,两组之间差异有统计学意义(P0.0001)。RT-PCR和Western blotting结果也表明OE组细胞的VEGF、CD44和c-Myc基因的表达和蛋白水平明显低于NC组,CDH1和Nm23的表达水平明显增高(P值均小于0.05)。体内实验：皮下移植瘤免疫组化发现：OE组中Nm23和CDH1的表达水平高于NC组,差异有统计学意义(P=0.0383和0.0232)。结论Per2基因明显降低了A549肿瘤细胞的侵袭迁移能力。Per2基因通过调节与肿瘤侵袭迁移相关基因来抑制A549肿瘤细胞侵袭迁移能力。其中,Per2基因下调A549细胞中的促肿瘤侵袭迁移相关基因,如VEGF、CD44和c-Myc基因的表达水平,上调抑肿瘤侵袭迁移相关基因,如Nm23和CDH1。本实验为深入研究Per2基因影响肺癌侵袭转移的分子机制和信号通路奠定基础,具有重要的理论意义,并可为肺癌侵袭转移的诊断与治疗开辟新的思路。
【关键词】：节律基因 Per2 肺癌 侵袭转移
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-10
• 第一部分 过表达Per2基因慢病毒的构建包装及稳转细胞10-34
• 1.实验材料10-13
• 2.实验方法13-28
• 3.28-34
• 第二部分 Per2基因对A549细胞体外侵袭迁移的影响及相34-42
• 1.实验材料34-35
• 2.实验方法35-37
• 3.结果37-42
• 第三部分 稳定转染A549肺癌细胞株的体内转移瘤模型42-49
• 1.实验材料42-43
• 2.实验方法43-45
• 3.结果45-49
• 讨论49-52
• 结论52
• 参考文献52-54
• 综述54-65
• 参考文献60-65
• 致谢65

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2 ;肿瘤坏死因子受体在人类肺癌细胞和正常肺组织中的表达[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1997年02期

3 巩国亭,田立华,宋佃刚;儿童胸水查到肺癌细胞[J];上海医学检验杂志;1998年02期

4 王洪斌,熊海涛,苏万芳,胡匡祜,黄志英;肺癌细胞形态量化和结构特征的抽取[J];生物物理学报;1999年01期

5 董强刚,江晓丰,沙慧芳,李鲁萍,乔生军,许凯黎;外周血循环中肺癌细胞的流式细胞仪定量分析[J];肿瘤;2000年01期

6 ;能杀死肺癌细胞的蛋白质[J];医学情报工作;2000年03期

7 周晓琦,刘剑平,李彤;化疗药物对原代肺癌细胞周期的影响[J];中国老年学杂志;2003年09期

8 王洪武,刘静,段蕴铀,杨平地,黄友章,张燕群,周一欣,冯华松,颜霞,陆海英;氩氦靶向治疗对肺癌细胞的灭活作用[J];海军总医院学报;2003年02期

9 胡振红,彭琪琳,汪君,傅祖红,司斌,刘志遐;肺癌细胞在缺氧状态下体外侵润力的变化及分子基础[J];中国医师杂志;2004年02期

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4 王秦秦;姜平;李继梅;唐睿珠;陈新明;;肺癌细胞相关蛋白分子实验研究[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年

5 谢庆军;李季风;胡晓燕;;超级智能基因药物对人恶性肺癌细胞的的抑制作用[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年

6 李鸣;黄承钰;魏大鹏;;药食两用植物提取物影响肺癌细胞生长的血清药理学研究[A];中国营养学会第九次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2004年

7 冯华松;黄友章;段蕴铀;杨平地;李泳群;兰雨;;氩氦刀冷冻处理的肺癌细胞增强树突状细胞诱导抗肿瘤效应[A];第一届中国肿瘤微创治疗研讨会暨中国抗癌协会肿瘤微创治疗专业委员会成立大会论文集[C];2005年

8 冯华松;黄友章;段蕴铀;杨平地;兰雨;李泳群;;氩氦刀冷冻处理的肺癌细胞可致敏人骨髓树突状细胞[A];第一届中国肿瘤微创治疗研讨会暨中国抗癌协会肿瘤微创治疗专业委员会成立大会论文集[C];2005年

9 喻伦银;田鸿生;舒清波;刘铭球;夏东;;超氧化物歧化酶对A_(549)肺癌细胞一些生物学特性的影响[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

10 秦建军;周清华;袁淑兰;王艳萍;陈晓禾;何金涛;;逆癌酮对肺癌细胞的生长抑制作用及其机理的初步研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

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1 记者 文俊 实习生 范敏 通讯员 罗芳;新技术“点亮”肺癌细胞[N];湖北日报;2014年

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4 特约记者 万初升;“核弹”自动追击肺癌细胞[N];家庭医生报;2005年

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6 记者 何德功;阻遏肺癌扩散[N];新华每日电讯;2002年

7 ;美证实SLC蛋白能杀死肺癌细胞[N];中国中医药报;2000年

8 张鑫华;肺癌有望实现早诊断[N];医药养生保健报;2006年

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10 ;美发现杀死肺癌的细胞蛋白[N];中国中医药报;2002年

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本文编号：633085