Bmi1在口腔舌鳞癌中的生物学作用及组蛋白去乙酰化酶抑制剂干预的实验研究

发布时间：2017-08-07 20:01

  本文关键词：Bmi1在口腔舌鳞癌中的生物学作用及组蛋白去乙酰化酶抑制剂干预的实验研究

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【摘要】：Bmi1基因(B lymphoma Mo-MLV insertion region 1 homolog,Bmi1)属于核染色质调控因子多梳基因(Polycomb group,Pc G)家族,主要通过染色质结构的改变来调控基因的转录后沉默,直接参与细胞周期、凋亡和衰老的调控,与干细胞稳态和肿瘤的发生发展密切相关。近来,大量研究证实Bmi1在许多人类恶性肿瘤中异常高表达,因此其具有重要的诊断和治疗意义,并且可作为一种潜在的治疗靶点。但是目前其在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中的表达情况少有报道。为了研究Bmi1在舌鳞癌中相关生物学作用,设计并实施了如下实验:目的:阐明Bmi1在舌鳞癌细胞系和临床标本中的表达及其临床意义;探索以Bmi1为靶向的小分子抑制剂抗口腔鳞癌治疗的有效性,为抗肿瘤治疗提供新的靶点和理论基础。方法:1、应用免疫组织化学染色检测Bmi1和Ki67在舌鳞癌组织及正常舌体组织中的表达,分析Bmi1的表达水平与相关临床病理参数及患者总体生存率之间的关系。2、利用si RNA抑制舌鳞癌细胞中Bmi1的表达,通过MTT、Western blot、迁移试验、实时定量RT-PCR等实验分析其对舌鳞癌细胞的增值、凋亡、迁移、衰老、克隆形成率等相关生物学作用的影响。3、通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA和Na B处理舌鳞癌细胞后,观察其对舌鳞癌细胞相关生物学特征的影响。4、通过构建动物模型观察Bmi1基因沉默和Na B腹腔给药对肿瘤生长的影响。结果:1、通过q-PCR结果显示,除Tca8113细胞系外Bmi1的m RNA水平与正常舌粘膜组织相比,在Cal27、SCC9、SCC25、HN4、HN6、HN12细胞中分别提高大约3.45、3.71、3.57、8.42、5.82和6.21倍(P0.01)。Western blot实验结果也证实除了Tca8113外,Bmi1在TSCC细胞系中呈高表达。免疫荧光染色结果显示Bmi1稳定并主要表达于三种细胞系的细胞核当中。免疫组织化学染色结果显示:52例舌鳞状细胞癌组织中36例Bmi1呈强阳性表达(69.2%);16例舌正常黏膜组织中13例Bmi1呈弱阳性或阴性表达(81.3%)。因此,Bmi1在舌鳞状细胞癌组织与正常舌体组织中的表达有显著差异(P0.01)。在研究的52例舌鳞状细胞癌患者中Bmi1表达与病人的年龄、性别、肿瘤大小、局部浸润、病理分级、临床分期无关,与淋巴结转移显著相关(P=0.0367)。免疫组化染色结果表明:Bmi1表达与Ki67表达显著相关(P=0.0384);结合临床随访资料,对患者总体生存情况进行分析,发现Bmi1高表达组患者的总体生存率明显低于低表达组患者(log-rank,P=0.0179)。2、Bmi1基因沉默显著抑制舌鳞癌细胞的增殖和迁移并且诱导细胞凋亡,显著降低舌鳞癌细胞克隆形成率、降低CD44+CD133+双阳性细胞亚群比例、诱导细胞衰老、增强顺铂化疗药物的敏感性。3、HDACi TSA和Na B能够有效抑制舌鳞癌细胞中Bmi1的表达。有效地抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成以及CD44+CD133+双阳性细胞亚群比例,诱导肿瘤细胞凋亡、衰老并且增强化疗药物的敏感性,获得了与Bmi1基因沉默相类似的表型变化。但是也不完全一致,实验过程中我们发现TSA处理的细胞发生EMT样形态改变并伴随E-cadherin表达下调和Vimentin表达上调。我们也证明了在舌鳞癌细胞中Na B的这些抗癌作用至少部分是通过下调Bmi1的表达来实现的。4、通过构建动物模型发现Bmi1的基因沉默和Na B的药理学抑制分别与对照组相比都能够明显抑制肿瘤的生长。结论:Bmi1在舌鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达,与颈淋巴结转移显著相关和患者的预后及总体生存率也显著相关,提示Bmi1的异常表达可能与舌鳞癌的发生发展有关,并且可作为一种新的生物标志物用于患者的诊断和预后预测。其次,选择像Na B这样合适的HDACi可作为一种新的抗舌鳞癌治疗的药物。
【关键词】：舌鳞状细胞癌 Bmi1 组蛋白去乙酰化酶抑制剂
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.85
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 符号说明10-12
• 前言12-15
• 第一部分 Bmi1在舌鳞癌组织及舌鳞癌细胞系中的表达及临床意义15-34
• 1 材料与方法15-25
• 2 结果25-33
• 3 讨论33
• 4 结论33-34
• 第二部分 Bmi1沉默对舌鳞癌细胞生物学功能的影响34-50
• 1 材料与方法34-41
• 2 结果41-48
• 3 讨论48-49
• 4 结论49-50
• 第三部分 HDACi干预对舌鳞癌细胞表型的影响及相关机制50-66
• 1 材料与方法50-52
• 2 结果52-63
• 3 讨论63-65
• 4 结论65-66
• 参考文献66-72
• 文献综述72-82
• 参考文献77-82
• 攻读学位期间发表文章情况82-83
• 致谢83

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本文编号：636420