PARP1在卵巢癌的表达及抗氧化作用研究

发布时间：2017-08-08 14:09

  本文关键词：PARP1在卵巢癌的表达及抗氧化作用研究

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【摘要】：[研究背景]卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,其发病率仅次于子宫内膜癌和宫颈癌列居第三位,但其死亡率却占各类妇科肿瘤之首,严重威胁女性身体健康。卵巢癌早期一般无临床症状,很难得到早期诊断,70%的患者就诊时已为晚期。目前,卵巢癌的治疗临床上主要采用手术切除和药物化疗联合治疗,且预后很差,5年生存率仅30%。由于卵巢癌极高的恶性程度和极低的生存率,因此研究卵巢癌的恶性生物学行为及其发病机制就变得极其重要。PARP是存在于多数真核细胞中的一种多功能蛋白质翻译后修饰酶,其PAPR1约占90%。当DNA损伤时,PARP1可以识别DNA损伤片段并招募DNA修复蛋白到DNA损伤位点,因此PARP1被认为是DNA损伤的感受器。受它修饰的蛋白质有组蛋白、RNA聚合酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等。PARP1可以对组蛋白进行ADP-核糖基化修饰使组蛋白从染色质上脱离下来,从而有助于修复蛋白结合进行DNA的损伤修复。近年来有研究发现,PARP1在乳腺癌、鼻咽癌、子宫内膜癌和肺癌等多种肿瘤中普遍高表达,提示PARP1有可能是肿瘤细胞生存所必须的,以及PARP1抑制剂用于治疗肿瘤的可能性。因此,我们在卵巢癌中检测了PARP1的表达情况,发现PARP1在卵巢癌中同样高表达。为了进一步研究PARP1对卵巢癌细胞生存所起到的作用,我们用PARP1抑制剂PJ-34及敲除PARP1表达来研究其功能。结果发现,PJ-34或敲除PARP1表达都可以抑制卵巢癌细胞生长。进一步研究发现PARP1抑制显著升高了卵巢癌细胞的ROS水平,同时诱导DNA双链断裂。而PARP1抑制对卵巢癌细胞的生长抑制作用可被自由基清除剂NAC所拯救,说明PARP1通过提高卵巢癌细胞的抗氧化能力对癌细胞发挥保护作用。[研究目的]研究PARP1在卵巢癌中的表达水平及生物学作用。[研究方法]一、利用Western blot和Real-time PCR技术检测PARP1在卵巢癌细胞和卵巢癌组织中的表达情况。二、利用平板克隆形成实验检测PARP1抑制对卵巢癌细胞的生长抑制作用。三、利用流式细胞术检测PARP1抑制对卵巢癌细胞ROS水平变化的影响。四、利用平板克隆形成实验检测PARP1抑制剂和NAC单独及联合处理对卵巢癌细胞生长的抑制作用。五、利用免疫荧光和Western blot方法检测PARP1抑制后,卵巢癌细胞γ-H2AX的焦点形成及蛋白表达情况。六、利用Real-time PCR检测PARP1抑制后卵巢癌细胞氧化损伤相关基因GPX1、GPX3、PRDX1、NOX4等的表达。[实验结果]一、PARP1在卵巢癌细胞A2780、HEY、SKOV3、 HO8910、HO8910PM和OVCAR3中高表达,而在正常输卵管上皮细胞FTE-187中低表达。PARP1在卵巢癌组织中同样高表达。二、PJ-34对卵巢癌细胞A2780、HEY、H08910具有明显的增殖抑制作用,而对正常输卵管上皮细胞FTE-187影响较小。三、PJ-34诱导A2780、HO8910、HEY、SKOV3等卵巢癌细胞ROS水平升高。PARP1表达沉默的A2780细胞ROS水平同样升高。四、PARP1功能缺陷的卵巢癌细胞对H202和MTH1抑制剂更敏感。抗氧化剂NAC处理卵巢癌细胞A2780可以拯救PJ-34对卵巢癌细胞的增殖抑制作用,说明PJ-34对癌细胞的生长抑制作用是通过升高ROS介导的。五、PJ-34处理卵巢癌细胞A2780可以诱导DNA双链断裂,当PJ-34和NAC联合处理后可以降低DNA双链断裂,说明DNA双链断裂是由ROS升高所引起的。六、部分卵巢癌细胞,如A2780、HO8910,经PJ-34处理后,GPX1表达下调。[结论]PARP1在卵巢癌细胞中普遍高表达。PARP1通过降低氧化压力对卵巢癌细胞发挥保护作用。
【关键词】：卵巢癌 PARP1 ROS DNA双链断裂
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符号说明12-13
• 前言13-17
• 材料与方法17-37
• 结果37-47
• 一、PARP1在卵巢癌细胞和组织中普遍高表达37-38
• 二、PARP1抑制对卵巢癌具有增殖抑制作用38-40
• 三、PARP1抑制诱导卵巢癌细胞ROS产生40-41
• 四、NAC可以拯救PARP1抑制对卵巢癌细胞生长的抑制作用41-44
• 五、PARP1抑制可诱导卵巢癌细胞DNA双链断裂44-45
• 六、PARP1调控ROS的机制研究45-47
• 讨论47-50
• 结论50-51
• 参考文献51-57
• 致谢57-58
• 硕士期间待发表论文及参与发表的论文58-59
• 附件59

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本文编号：640360