BRCA1启动子甲基化与散发性乳腺癌的相关性研究

发布时间：2017-08-09 06:32

  本文关键词：BRCA1启动子甲基化与散发性乳腺癌的相关性研究

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【摘要】：目的:乳腺癌(Breast cancer,BC)这一恶性肿瘤,严重地影响着女性的生命健康。乳腺癌可以分为两种类型,家族性和散发性,其中大部分(约为95%)是散发性乳腺癌,家族性约占5%。乳腺癌易感基因1(Breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)的突变对家族性乳腺癌的发生发展有着非常重要意义。但是,研究发现在散发性乳腺癌中,BRCA1基因的序列是完整的,却存在着其转录的m RNA明显减少这一现象,说明BRCA1基因依靠其他的机制参与了散发型乳腺癌的发生。目前的研究认为抑癌基因DNA异常甲基化在正常细胞发生恶性转变以及在恶性肿瘤的侵袭性逐渐增强的过程中占有重要的作用。有研究表明,BRCA1基因启动子异常甲基化与BRCA1基因表达的缺失及散发性乳腺癌的发生、发展密切相关,并且散发性三阴性乳腺癌这一基因启动子甲基化的概率高于其他类型。本实验拟在散发性乳腺癌的癌组织中,检测BRCA1启动子中CpG岛的甲基化频率,比较在不同类型的乳腺癌中甲基化率的差异,探讨乳腺癌易感基因BRCA1启动子甲基化和散发性乳腺癌的临床特点之间的关系,并为其预后提供指导作用。方法:1实验对象随机选择河北医科大学第四医院乳腺中心2014年4月-2015年3月乳腺癌患者79例,均为女性,年龄处于27~81岁,中位年龄为53岁。患者术前均经空心针穿刺病理证实为乳腺癌,且未行放疗、化疗及内分泌治疗。无乳腺癌家族史,无既往其他恶性肿瘤病史。根据2013年6月美国临床肿瘤协会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)、美国病理医师学院(College of American Pathologists,CAP)颁布的乳腺癌雌激素受体(Estrogen receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)及Her2蛋白免疫组织化学检测标准,按照St.Gallen2013年专家共识及免疫组化结果,将79例患者分为四个亚型:(1)Luminal A型乳腺癌22例,指ER/PR阳性且PR高表达(≥20%)、Her2阴性、Ki-67低表达(14%)的乳腺癌;(2)Luminal B型乳腺癌19例,指ER/PR阳性,若Her2阴性时Ki-67高表达或PR低表达,若Her2阳性时Ki-67可任何状态的乳腺癌;(3)Her2阳性型乳腺癌18例,指Her2阳性,ER、PR皆为阴性的乳腺癌;(4)三阴性乳腺癌20例,指ER、PR均为阴性,无Her2蛋白过表达或基因扩增的乳腺癌。并且详细记录临床病理资料。2实验过程采用组织DNA提取试剂盒提取DNA,并行亚硫酸氢盐处理DNA,则未甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,随后以5'-TATTTTTGTGGGGTGAATTTAATATG-3'为上游引物,5'-CCCTCAACC CCAATATTTATTATTT-3'为下游引物,进行PCR扩增BRCA1启动子CpG岛的目的序列,长为195bp,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,将PCR产物克隆至T载体后提取质粒送测序公司进行测序,即亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)。同时在病理科用该79名患者的乳腺癌组织石蜡标本,行免疫组织化学染色检测。3统计分析采用SPSS19.0统计软件对数据进行统计学处理,检验水准为0.05。对计量资料采用均值±标准差((?)±s)表示,对计数资料采用n(%)表示。计数资料统计采用卡方检验(X~2)。因为各组的甲基化率不符合正态分布,采用中位数(四分位数间距)描述,两组间的比较采用Kruskal-Wallis秩和检验,多组间的比较采用Mann-Whitney U秩和检验。结果:1乳腺癌各分子亚型临床生物学特性的比较实验中各亚型患者的年龄、T分期(肿瘤大小)、N分期(淋巴结转移个数)、TNM分期、病理类型及组织学分级经统计学(卡方检验)分析:在病理类型方面,三阴型和其他分子亚型(Luminal A型,Luminal B型,Her2阳性型)比较有统计学差异(分别为X~2=10.462,P=0.0150.05;X~2=10.181,P=0.0170.05;X~2=7.110,P=0.0290.05),三阴型主要以乳腺浸润性导管癌和髓样癌为主,其他分子亚型主要为浸润性导管癌。在组织学分级方面,(1)Luminal A型和其他分子亚型(Luminal B型,Her2阳性型,三阴型)比较有统计学差异(分别为X~2=7.819,P=0.0200.05;X~2=24.130,P=0.0000.05;X~2=15.724,P=0.0000.05),Luminal A型主要为II级,其他分子亚型主要为III级;(2)Luminal B型和Her2阳性型比较有统计学差异(X~2=7.441,P=0.0060.05),Luminal B型主要为II级和III级,Her2阳性型主要为III级。其他分组的指标均无统计学差异(P均0.05)。2整体12个位点的甲基化情况的描述经统计学分析,12个位点的甲基化频率最高的为位点-842和位点-782,都为65.8%,说明这两个位点甲基化状态较常见,最低的为位点-742,为10.1%,说明该位点甲基化状态较少见。3乳腺癌各分子亚型的12个位点的甲基化概率的差异性比较经统计学分析,(1)对于CpG位点-881的甲基化率,Luminal B型分别高于三阴型和Her2阳性型(X~2=8.046,P=0.0050.05;X~2=4.937,P=0.0260.05);(2)对于CpG位点-764的甲基化率,三阴型高于Luminal A型(X~2=8.066,P=0.0050.05);(3)对于CpG位点-742的甲基化率,三阴型分别高于Luminal A型和Luminal B型(X~2=7.700,P=0.0060.05;X~2=6.736,P=0.0090.05);(4)其他位点在各分子分型中的甲基化率均无统计学差异(P均0.05)。4不同分子亚型总体甲基化率的差异性比较经统计学分析,四个亚型的总体甲基化率均无统计学差异(P=0.9540.05)。5三阴型和其他分子亚型(Luminal A型+Luminal B型+Her2阳性型)的总体甲基化率的差异性比较经统计学分析,三阴型和其他分子亚型的总体甲基化率无统计学差异(P=0.6420.05)。6各组或各样本甲基化率与临床生物学特性之间的关系或趋势经统计学分析,不同临床资料分组的患者的总体甲基化率无统计学差异(P均0.05),说明甲基化情况与上述临床资料无关联。结论:1 BRCA1启动子CpG位点-842和位点-782的甲基化可能与散发性乳腺癌的发生相关。三阴性乳腺癌中CpG位点-764和位点-742的甲基化率均高于Luminal A型乳腺癌,三阴性乳腺癌中CpG位点-742的甲基化率高于Luminal B型乳腺癌。CpG位点-764和位点-742可能与散发性三阴性乳腺癌的发生相关,需进一步研究。2散发性三阴性乳腺癌患者中BRCA1基因启动子(距转录起始点-908~-714的基因序列)的甲基化率与其他分型的散发性乳腺癌(Luminal A型、Luminal B型、Her2阳性型)甲基化率无明显差别。3散发性乳腺癌BRCA1启动子的甲基化率与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、病理类型及组织学分级无明显关联。
【关键词】：DNA甲基化 BSP BRCA1 基因测序 散发性乳腺癌 三阴性乳腺癌
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文缩写13-14
• 前言14-16
• 材料与方法16-26
• 结果26-28
• 附图28-33
• 附表33-40
• 讨论40-44
• 结论44-45
• 参考文献45-47
• 综述 BRCA1与乳腺癌相关的研究进展47-57
• 参考文献54-57
• 致谢57-58
• 个人简历58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：643931