CEA调控的溶瘤腺病毒携带TRAIL和MnSOD双基因治疗肺癌的研究

发布时间：2017-08-09 10:33

  本文关键词：CEA调控的溶瘤腺病毒携带TRAIL和MnSOD双基因治疗肺癌的研究

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【摘要】：肺癌是全球最主要的恶性肿瘤之一,其中肺腺癌是肺癌主要的亚型。在我国,肺癌的发病率和死亡率位列所有癌症的首位,其中死亡率更是高于世界平均水平。因此,探索和选择一种安全高效的治疗肺癌的方法势在必行。近年的研究表明,癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)是非小细胞肺癌的重要标志物,在肺癌的诊断和预后检测中具有一定的临床意义,也是一种有效的癌症治疗靶标。有报道称CEA启动子介导的溶瘤腺病毒携带抗癌基因具有良好的抗癌效果。然而,溶瘤腺病毒介导的单基因抗癌效果有限。为了达到更好的治疗效果,采用连接子连接两种抑癌基因的癌症靶向双基因-病毒疗法,有望达到协同治疗癌症的效果。本研究,我们通过删除溶瘤腺病毒的E1B 55k Da基因,采用CEA作为启动子来控制溶瘤腺病毒E1A的表达,同时利用caspase-8识别位点序列(IETD)连接抑癌基因TRAIL和MnSOD,构建得到靶向双基因-溶瘤腺病毒CD55-TRAILIETD-MnSOD。通过real-time PCR筛选出CEA阳性的肿瘤细胞;接着利用MTT、结晶紫、Hoechst33342染色、流式细胞术和western blot等体外实验检测重组溶瘤病毒抑制癌细胞增殖的能力以及引起凋亡的可能的信号通路;进一步,我们构建了裸鼠A549肺癌移植瘤模型,研究CD55-TRAIL-IETD-MnSOD体内抗癌效果。体外实验结果表明CD55-TRAIL-IETD-MnSOD比单基因溶瘤腺病毒CD55-TRAIL、CD55-MnSOD或其联合处理组都具有更明显的诱导凋亡的作用,同时对正常细胞无明显毒性。动物实验表明,CD55-TRAIL-IETD-MnSOD能更好的抑制肿瘤生长、诱导肿瘤组织凋亡,同时不引起明显的肝、肾、脾等组织损伤。综上,本研究构建的癌症靶向双基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD首次运用CEA介导双基因-病毒来治疗癌症,有望为肺癌的临床治疗提供有效的治疗策略。
【关键词】：溶瘤腺病毒 CEA TRAIL MnSOD 肺癌
【学位授予单位】：浙江理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 研究概述8-13
• 1.1 前言8-9
• 1.2 肿瘤的靶向基因-病毒治疗策略9-10
• 1.3 溶瘤腺病毒载体ZD55概述10-11
• 1.4 CEA启动子11
• 1.5 TRAIL基因11
• 1.6 MnSOD基因11-12
• 1.7 实验的目的及意义12-13
• 第二章 CEA调控的溶瘤腺病毒携带TRAIL和MnSOD双基因治疗肺癌的研究13-48
• 2.1 实验材料13-19
• 2.1.1 实验试剂13-14
• 2.1.2 主要质粒和菌株14
• 2.1.3 病毒14
• 2.1.4 细胞株14-15
• 2.1.5 实验仪器设备15-17
• 2.1.6 实验主要溶液的配备17-18
• 2.1.7 引物的设计与合成18-19
• 2.2 实验方法19-35
• 2.2.1 分子克隆：双靶向基因-病毒载体系统AdCEAp-D55的构建19-24
• 2.2.2 TRAIL/MnSOD双基因武装化的双靶向重组病毒的构建24-26
• 2.2.3 重组病毒的大量扩增、纯化和鉴定26-27
• 2.2.4 溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD体外抗瘤效果评价27-32
• 2.2.5 溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD体内抗瘤效果评价32-35
• 2.2.6 统计学分析35
• 2.3 实验结果及分析35-46
• 2.3.1 重组质粒的鉴定35-38
• 2.3.2 癌症靶向双基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD的特异性鉴定38-40
• 2.3.3 肿瘤细胞中病毒早期蛋白E1A和外源基因TRAIL和MnSOD的表达40
• 2.3.4 癌症靶向双基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD体外特异性抗肿瘤细胞生长作用40-42
• 2.3.5 癌症靶向双基因-病毒特异性诱导肿瘤细胞凋亡效应42-44
• 2.3.6 癌症靶向双基因-病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD体内抗肿瘤效果评价44-46
• 2.4 小结46-48
• 第三章 总结与展望48-50
• 参考文献50-55
• 硕士期间研究成果55-56
• 致谢56

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本文编号：644845